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描述：

该 Topoisomerase I 来源于牛痘病毒（vaccinia virus），通过基因重组方案制备纯化。其能解旋DNA的超螺旋结构，除此外其能识别并切割双链 DNA 末端 [5’C(T)CCTT↓]，并且与 DNA 形成共价连接形成稳定复合物。该共价复合物遇到DNA 的5’-OH基团后，重新连接形成完整 DNA 链。因此，使用该酶可作为 DNA 连接的有效工具，可用于 DNA 的载体连接（TOPO 克隆载体制备）、接头连接（NGS 建库）等实验。

应用
DNA-载体连接
接头连接

储存：-20°C 可保存 3 年。
TOPO 酶保存液：20mM Tris-HCl，pH7.8，150mM NaCl，
0.1% Tween20，50%甘油。
反应实例 1（质粒解旋）
10×TOPO Buffer 2.5 μl
超螺旋质粒 DNA 1-20 μg
Vaccinia TOPO (5pmol/μl) 1 μl
ddH2O Up to 25 ul
37°C 孵育 5-15min。
反应实例 2（接头连接）
10×TOPO Buffer 2.5 μl
2 M NaCl 2.5 μl
接头 A(含 CCCTT) 5-100 pmol
接头 B(含 5‘OH) 5-100 pmol
Vaccinia TOPO (5pmol/μl) 1 μl
ddH2O Up to 25 ul
37°C 孵育 5-15min。
注意：（1）双链接头 A 通常 5’做 NH2 封闭修饰，以防止自连接；接头 A 的 CCCTT 后通常包含 5-12bp 尾巴，再长的尾巴会导致连接效率大幅下降；
（2）双链接头 B 的 5’端必须包含-OH。
（3）由于该酶应用广泛，在不同的实验中使用策略不同，需要灵活运用。该类实验请根据文献）进行调整。

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