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丹毒杆菌(SER)核酸检测试剂盒
¥2990猪细小病毒(PPV)核酸检测试剂盒
¥2990猪圆环病毒通用型(PCV-U)核酸检测试剂盒
¥2990伪狂犬病毒通用型(PRV-gB)核酸检测试剂盒
¥2990乙型流感病毒(IBV)核酸检测试剂盒
¥2990甲型流感病毒(IAV)核酸检测试剂盒
¥2990新城疫病毒中强毒(NDV-W)核酸检测试剂盒
¥2990禽脑脊髓炎病毒(AEV)核酸检测试剂盒
¥2990禽呼肠孤病毒(ARV)核酸检测试剂盒
¥2990禽偏肺病毒(aMPV)核酸检测试剂盒
¥2990禽肺病毒(APV)核酸检测试剂盒
¥2990禽腺病毒(FADV)核酸检测试剂盒
¥2990转基因植物EPSPS基因PCR检测试剂盒
产品名称 | 产品货号 | 包装规格 |
转基因植物EPSPS基因PCR检测试剂盒 | BJ-P7940 | 50T |
运输:低温
保存:-20℃避光
有效期:一年
货期:2-3周
产品用途:公司产品仅供科研研究实验
试剂组成:
特点:
1. 即开即用,用户只需要提供样品。
2. 根据保守序列设计的专一性引物。
3. 灵敏度可以达到几百拷贝/反应。
4. 一管式荧光定量PCR检测,避免后续污染。
5. 本试剂盒足够50次20μL反应体系的荧光定量PCR。
本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。
操作流程:
RNA 提取 → 反转录 → 设计引物 → Q-PCR
一、 总RNA提取
A组织样本:迅速将新鲜的组织切成合适的大小,在液氮中充分研磨后加裂解液裂解,或直接加入裂解液后用匀浆器匀浆。每30-50mg组织加1ml Trizol。
B全血样品:加入3-5倍体积的红细胞裂解液到血样中,室温孵育10min,室温3500rpm离心6min。弃上清,原每2-3ml全血样品加1mL Trizol。
C细胞样品:悬浮液中生长的细胞,通过离心收集细胞后,每1×105〜106细胞加入1mL Trizol,移液器吹打混匀,直接裂解或-80℃储存一个月。贴壁生长的细胞,有两种处理方法。一种是移除培养基后,将1mL Trizol直接加入直径3.5cm的培养皿中裂解细胞。或是先用将贴壁细胞消化下来并收集后,再加入1mL Trizol进行裂解。(Note:加入Trizol前, PBS充分洗涤细胞去除残余培养基。)
二、直接法
1)加入1ml Trizol试剂,混匀,冰上孵育10min。
2)4℃,12000rpm离心10min,小心转移上清液到不含颗粒的新EP管中。
3)加入200ul氯仿,剧烈振荡15秒,室温孵育5min。
4)4℃,12000rpm离心15min。混合液分三层,包括最下面的氯仿有机相,中间相和上层水相。小心转移上层水相到新的EP管(大约60%体积的Trizol),不要吸取中间相,可留下少量上层液体!(Note:质量比数量更重要!)
5)加入等体积的异丙醇,轻轻地颠倒混匀约10次,室温放置10min。
6)4℃,12000rpm离心10min。弃上清,1ml 75%乙醇洗涤RNA沉淀两次。
7)4℃,12000rpm离心5min,弃上清,室温下风干5-10min(不要太干,过度干燥会导致RNA难溶解!)。将RNA溶于15μl-50μlDEPC水中。
8)立即进行反转录反应,或先-80℃长期保存。
公司正在出售的产品:
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注意事项:
1、所有步骤均应在超净工作台上进行,超净台紫外照射至少15min。
2、所有试剂应为此实验专用。
3、使用75%乙醇或其他去污剂擦拭工作台,避免表面污染。
4、进入荧光定量PCR 操作实验室后需要佩戴一次性无菌口罩、无菌乳胶手套、实验中尽量避免与同事交谈,防止PCR 模板污染。
5、实验中使用各种规格的离心管,枪头及配制试剂和溶解沉淀用的水,均应焦碳酸二乙酯(DEPC)处理后使用,以去除吸附的RNA酶污染。
6、使用Trizol试剂时,避免接触皮肤或衣服。避免吸入蒸气。
7、qPCR反应需要qPCR级水,试剂和试管。请务必使用正确类型的qPCR光学PCR管和盖子。不可用普通的PCR管。
8、加样前,先布局,规划加样顺序以避免交叉污染。
9、所有实验应均应设置无模板对照,其中包含除DNA或cDNA样品以外的所有反应组分。
10、先配制qPCR反应混合液,减少误差。
11、加样后上机前,务必通过瞬离将反应液离至管底,并消除溶液中的气泡,因为气泡会干扰荧光检测且降低酶活性,从而降低扩增效率。