Rat TIMP-1 ELISA Kit
规格： 96T
检测范围：31.2pg/ml→2000pg/ml
敏感性： ＜3pg/ml
特异性： 系统和其它 TIMP 无交叉反应。
保存： 2-8℃（频繁使用时）-20℃（长时间不用时）。
有效期： 6 个月(4℃)；12 个月（-20℃）。
用途： 用于体外定量分析大鼠血清、血浆、细胞裂解液、细胞培养上清。
Rat TIMP-1 ELISA Kit工作原理
Tissue inhibitors of metalloproteinases，TIMPs，基质金属蛋白酶抑制因子，调节基质金属蛋白酶
的活化及蛋白活性。共有四个成员：TIMP-1，TIMP-2，TIMP-3，TIMP-4。TIMP-1 可由多种细
胞产生，通过非共价键结合抑制 MMPs 的活性。本试剂盒所用标准品为重组大鼠 TIMP-1，从
Cys24—ala217，194 个氨基酸，分子量 21.5KDa，由于糖化，分子量变为 32-34KDa
所提供的大鼠 TIMP-1 ELISA Kit 是典型的夹心法酶联免疫吸附测定试剂盒（Enzyme
Linked-Immuno-Sorbent Assay, ELISA）。预先包被的抗体和检测相抗体都是亲和纯化多克隆抗体。
检测相抗体经生物素（biotin）标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后，PBS 或
TBS 洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应；经过 PBS 或 TBS 的*洗涤后用底物 TMB
显色。TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深
浅和样品中的 TIMP-1 呈正相关。

需要而未提供的试剂和器材

1. 标准规格酶标仪。

2. 自动洗板机。

3. 恒温箱

4. 系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，用多通道移液器。

5. 干净的试管和 Eppendof 管。

6. 用去离子水将 25X 洗涤缓冲液稀释 25 倍，成 1X 洗涤缓冲液。

注意事项

1． 使用前 TMB 显色液应为无色透明溶液，若发现颜色异常，请及时与厂家。

2． 用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。

3 要严格避免操作过程中酶标板干燥。干燥会使酶标板上生物成份迅速失活。

4． 为免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和试管。

5． 禁止混用不同批次试剂盒内的试剂。

6. 本公司提供的 96 孔酶标板是单条可拆型酶标板，用户可按需求使用；剩余的酶标板请

 按保存条件贮存。

7. 揭封板膜和覆盖封板膜时应避免用力过大导致液体溅出。

洗板方法

手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将 1X 洗涤缓冲液至少 300ul 注入孔内，浸泡 1-2 分钟。根据需要，重复此过程数次。

自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。

样品的准备和保存

样品如果不立即分析，应分装后冷冻保存，且避免反复冻融。

细胞培养上清——离心去除沉淀，立即分析或分装后-20℃冷冻保存。

血清——用干净试管收集血液，室温凝固 30 分钟，离心 1500×g 15 分钟，收集血清。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。

血浆—在冰块上收集肝素或 EDTA 抗凝血，抽血后 30 分钟内离心 1500×g 15 分钟。血浆在 2-8℃进一步离心 10000×g 10 分钟，以*清除血小板。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。

细胞裂解液——对于贴壁细胞，去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。加入适量裂解液，用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常 10 秒后，细胞就会被裂解。对于悬浮细胞，离心收集细胞，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。加入适量裂解液，用枪吹打把细胞吹散，用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后，10000—14000g 离心 3-5 分钟，取上清。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。

样品稀释的一般原则

用户须估计样品待测因子的含量，决定适当的稀释倍数，以使稀释后样品中待测因子的浓度处于ELISA 试剂盒的*检测范围。根据待测因子含量高、中、低的不同，分别采取不同的

稀释方案：

高——指待测因子在 20-200ng/ml。一般按 1：100 稀释。297ul 样品稀释液加 3ul 样品。

中——指待测因子在 2-20ng/ml。一般按 1：10 稀释。225ul 样品稀释液加 25ul 样品。

低——指待测因子在 31.2-2000pg/ml。按 1：2 稀释。100ul 样品稀释液加 100ul 样品。

特低——指待测因子≤31.2pg/ml。样品一般不做稀释，或按 1：2 稀释。

操作程序总结：

1． 加样品和标准品，37℃反应 90 分钟。不洗。

2． 加生物素标记抗体，37℃反应 60 分钟。1X 洗涤缓冲液洗涤 3 次。

3． 加 ABC，37℃反应 30 分钟。1X 洗涤缓冲液洗涤 5 次。

4． TMB37℃反应 15-20 分钟。

5． 加入 TMB 终止液，读数。

人 蛋白激酶A PKA Protein kinase A

人 蛋白激酶C PKC protein kinase C

人 蛋白激酶C-β1 PKCβ1 protein kinase C- β1

人 蛋白酪氨酸激酶 PTK;CD115 protein tyrosine kinase

人 蛋白酪氨酸磷酸酶 IA-2 IA-2

人 蛋白酪氨酸磷酸酶 PTP;PTPase;CD148 protein tyrosine phosphatase

人 蛋白酪氨酸磷酸酶1B PTP1B protein tyrosine phosphatase 1B

人 蛋白磷酸酶 PP Protein phosphatase

人 蛋白酶激活受体4 PAR4 Protease Activated Receptor 4

人 蛋白质二硫键异构酶 PDI protein disulfide isomerase

人 刀豆素A ConA Concanavalin A

人 低半乳糖化IgA IgA Immunoglobulin A

人 低分子肝素 LMWH low molecular weight heparin

人 低密度脂蛋白 LDL Low Density Lipoprotein