Rat VEGFR3 ELISA Kit
规格： 96T
检测范围：156pg/ml→10,000pg/ml。
特异性： 系统和其它细胞因子无交叉反应。
敏感性： ＜10pg/ml
保存： 2-8℃（频繁使用时）；-20℃（较长时间不用时）。
有效期： 6 个月(4℃)；12 个月（-20℃）。
用途： 用于体外定量分析小鼠血清、细胞裂解液、细胞培养上清。
Rat VEGFR3 ELISA Kit工作原理
VEGFR1(Flt-1), VEGFR2(KDR/Flk-1), VEGFR3(Flt-4)都属于受体酪氨酸激酶（RTKs）家族第三亚
族。VEGFR1，2，3 几乎都在内皮细胞上表达，这些受体在血管增生和血管形成过程中起基本作
用。VEGFR3 的前体有 1298 个氨基酸。成熟形态包括 751 个氨基酸的细胞外部分，22 个氨基酸
的跨膜区和 482 个氨基酸的细胞内部分。VEGF-C 和 VEGF-D 都能结合并激活 VEGFR3。VEGFR3
对淋巴管的形成有重要作用。
所提供的 VEGFR3 ELISA Kit 是典型的夹心法酶联免疫吸附测定试剂盒（Enzyme
Linked-Immuno-Sorbent Assay, ELISA）。预先包被的抗体为单克隆抗体，克隆号 54716。检测相抗
体也是单克隆抗体，经生物素（biotin）标记，克隆号 54733。样品和生物素标记抗体先后加入酶
标板孔反应后，PBS 或 TBS 洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应；经过 PBS 或 TBS 的
*洗涤后用底物 TMB 显色。TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成
zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的 VEGFR3 呈正相关。

需要而未提供的试剂和器材

1. 标准规格酶标仪。

2. 自动洗板机。

3. 恒温箱

4. 系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，用多通道移液器。

5. 干净的试管和 Eppendof 管。

6. 用去离子水将 25X 洗涤缓冲液稀释 25 倍，成 1X 洗涤缓冲液。

注意事项

1． 使用前 TMB 显色液应为无色透明溶液，若发现颜色异常，请及时与厂家。

2． 用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。

3 要严格避免操作过程中酶标板干燥。干燥会使酶标板上生物成份迅速失活。

4． 为免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和试管。

5． 禁止混用不同批次试剂盒内的试剂。

6. 本公司提供的 96 孔酶标板是单条可拆型酶标板，用户可按需求使用；剩余的酶标板请

 按保存条件贮存。

7. 揭封板膜和覆盖封板膜时应避免用力过大导致液体溅出。

洗板方法

手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将 1X 洗涤缓冲液至少 300ul 注入孔内，浸泡 1-2 分钟。根据需要，重复此过程数次。

自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。

样品的准备和保存

样品如果不立即分析，应分装后冷冻保存，且避免反复冻融。

细胞培养上清——离心去除沉淀，立即分析或分装后-20℃冷冻保存。

血清——用干净试管收集血液，室温凝固 30 分钟，离心 1500×g 15 分钟，收集血清。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。

血浆—在冰块上收集肝素或 EDTA 抗凝血，抽血后 30 分钟内离心 1500×g 15 分钟。血浆在 2-8℃进一步离心 10000×g 10 分钟，以*清除血小板。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。

细胞裂解液——对于贴壁细胞，去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。加入适量裂解液，用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常 10 秒后，细胞就会被裂解。对于悬浮细胞，离心收集细胞，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。加入适量裂解液，用枪吹打把细胞吹散，用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后，10000—14000g 离心 3-5 分钟，取上清。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。

样品稀释的一般原则

用户须估计样品待测因子的含量，决定适当的稀释倍数，以使稀释后样品中待测因子的浓度处于ELISA 试剂盒的*检测范围。根据待测因子含量高、中、低的不同，分别采取不同的

稀释方案：

高——指待测因子在 20-200ng/ml。一般按 1：100 稀释。297ul 样品稀释液加 3ul 样品。

中——指待测因子在 2-20ng/ml。一般按 1：10 稀释。225ul 样品稀释液加 25ul 样品。

低——指待测因子在 31.2-2000pg/ml。按 1：2 稀释。100ul 样品稀释液加 100ul 样品。

特低——指待测因子≤31.2pg/ml。样品一般不做稀释，或按 1：2 稀释。

操作程序总结：

1． 加样品和标准品，37℃反应 90 分钟。不洗。

2． 加生物素标记抗体，37℃反应 60 分钟。1X 洗涤缓冲液洗涤 3 次。

3． 加 ABC，37℃反应 30 分钟。1X 洗涤缓冲液洗涤 5 次。

4． TMB37℃反应 15-20 分钟。

5． 加入 TMB 终止液，读数。

人 高迁移率族蛋白B1 HMGB-1 High mobility group protein B1

人 高铁血红蛋白 HMB methemoglobin

人 睾酮 T Testoterone

人 弓形虫IgG抗体 Tox IgG Tox IgG

人 弓形虫IgM抗体 Tox IgM Ab Tox IgM antibody

人 钩端螺旋体IgG Lep IgG Lebtospira IgG

人 钩端螺旋体IgM Lep IgM Lebtospira IgM

人 孤啡肽 OFQ Orphanin FQ

人 谷氨酸 GLU Glutamic acid

人 谷氨酸脱羧酶 GAD GAD

人 谷氨酸脱羧酶65 GAD65 GAD65

人 谷氨酸脱羧酶自身抗体 GAD-Ab GAD-Ab

人 谷氨酰胺 Gln glutamine

人 谷胱甘肽 GSH glutathione