RwPE-2人前列腺正常细胞（STR鉴定）-上海联迈生物工程有限公司手机版

详细介绍

RwPE-2人前列腺正常细胞（STR鉴定）
英文名称：Human Prostate Normal Cells
规格：1*10 ⁶
细胞介绍
该细胞来源于54岁白人男性。源于正常成人前列腺周边组织的上皮细胞经过转染HPV-18后建系得到该细胞株。在三维基质胶培养时，在雄激素作用下，RWPE-1细胞形成腺胞并向培养基中分泌PSA（kallikrein 3, KLK3）。来源于RWPE-1的细胞再用Kirstin鼠类肿瘤病毒转染Ki-ras基因，建立了能成瘤的RWPE-2细胞株和 RWPE2-W99细胞株。同时，用N-甲醇-N-硝基脲处理RWPE-1，建立了一系列模拟前列腺癌进程中不同时期的成瘤细胞株，分别是 WPE1-NA22, WPE1-NB14, WPE1-NB11 和 WPE1-NB26 细胞株。据提供者报道，RWPE-1 细胞株经过检测，乙肝、丙肝、人免疫缺陷病毒都呈阴性。
一、细胞特性
1）来源：前列腺正常细胞
2）形态：上皮细胞样，贴壁生长
3）含量：>1x106 个/mL
4）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装
二、细胞收到后处理
RwPE-2人前列腺正常细胞（STR鉴定）在培养瓶中培养至良好状态后灌满*培养液并封好瓶口是细胞运输的办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的*培养液移入废液缸中，原瓶（T25瓶）保留6-8ml*培养液，悬浮细胞需离心处理，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。
三、细胞培养步骤
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中，加入约6ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
1、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
2、对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集，1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，进行离心收集，1000RPM条件下离心5分钟，去除上清，按冻存数量加入血清及DMSO，冻存比例为90%FBS+10%DMSO。
出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么？
（1）细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、破损、漏液等，重发；

冻存的细胞复苏后，绝大多数细胞未存活，重发；
存活的细胞静置24小时后，绝大多数细胞未存活，重发；
冻存的细胞复苏后或存活的细胞静置4小时后并且未开封，出现污染，重发；
视具体情况而定。

★ 注：如运输过程中导致细胞污染或者死亡，我们将无条件补发收货后十个工作日内有其他问题提供照片可半价重发。

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