检测试剂盒说明书

 MTT广泛用于检测细胞生长，其原理是MTT可以被活细胞线粒体内的脱氢酶还原生成深紫色的formazan结晶，而死细胞则无此活性。深紫色的formazan结晶被溶解后可以通过测定490 nm波长的光吸收而测定出其浓度，并由此推测出细胞的活力，细胞增殖越旺盛，则吸光度越高；细胞毒性越大，则吸光度越低。该方法广泛用于细胞活性检测、抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验和肿瘤放射敏感试验等。

检测试剂盒说明书

本产品的特点如下：
1. 采用*的Formazan溶MTT检测试剂盒解液，可以充分溶解formazan，减少误差。
2. 背景低，灵敏度高，线性范围宽，重复性好。
3. 本产品为足够500 次（5个96孔细胞培养板）微孔板检测。
4. 可用于生物活性因子活性检测、抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验、肿瘤放射敏感性测定等。
RNA提取法：试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚，其中异硫氰酸胍可裂解细胞，促使核蛋白体的解离，使RNA与蛋白质分离，并将RNA释放到溶液中。当加入氯时，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA进入水相，MTT检测试剂盒离心后可形成水相层和有机层，这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA，有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。

实验步骤：
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中，每一步都在zui条件下进行。
碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂，但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会*分离，当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时，变性的质粒DNA又恢复原来的构型，保存在溶液中，而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构，通过离心，染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
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