公司产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断！

1、细胞传代：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次；

2）添加 0.25%消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入 5ml 培养

液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min；

3）弃上清，沉淀细胞用 1-2ml 培养基重悬，然后按 1:2 比例进行分瓶传代，最后放入 37℃，5%CO2细胞

培养箱中培养；

2、细胞冻存：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次；

2）添加 0.25%消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入培养液终

止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min；

3）用适量的冻存液（FBS：DMSO=9 ：1）重悬细胞，并放置于冻存管中；

4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h 后转入液氮中进行长期保存。使用程序

降温盒可直接放入-80℃。

二、细胞培养操作

1) 复苏细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2) 细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-2 min（视细胞情况而定），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3) 细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例；a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

三、培养注意事项 

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象 发生请及时和我们联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需 细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由 客户自行承担。

3. 用 75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度 变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将 T25 瓶置于 37℃培养箱放置 2-4h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm 离心 3 min，弃上 清。加 5 mL PBS 重悬细胞，再 900 rpm-1000 rpm 离心 3 min，用新鲜的培养基重悬 细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通 交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞 的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基 (灌液培养基) 不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培 养条件新配制的培养基来培养细胞。     收到细胞后第一次传代建议 1：2 传代 。

9. 注意：  1:2 传代就是 1 个 T25 瓶传 2 个 T25 瓶或者 2 个 6cm 皿。不是 1 个 T25 瓶传 2 个10cm 皿。

公司正在出售的产品：

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NADPH oxidase 3： NADPH oxidase 3抗体 22RV1细胞，前列腺癌细胞 人肝癌细胞,Bel-7405细胞 CL-0024Anglne(人卵巢癌细胞)5×106cells/瓶×2

HA Others H4N8 甲型流感 H4N8 (A/chicken/Alabama/1/1975) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人细胞裂解液 (阳性对照) 大鼠Ⅹ(F10)ELISA试剂盒 cGMP(Mouse Cyclic guanosine monophosphate)  小鼠环0酸鸟苷 96T

NADPH oxidase 4： NADPH氧化酶NOX家族的成员4抗体 小肠血管内皮细胞Many types of cells包装：5 × 105次方(1ml)

CXCL16 Others Rat 大鼠 CXCL16 / SR-PSOX 人细胞裂解液 (阳性对照) 牛支原体ELISA试剂盒 PAP2c (Phosphatidic acid phosphatase 2c) 0脂酸0酸酶2C(抗原) 0.5mg

phospho-c-Jun(Thr93)： 0酸化原癌基因c-Jun抗体 小鼠浆细胞瘤;MPC-11

L929细胞，小鼠肺成纤维细胞 SGC7901(胃腺癌细胞) 大鼠脑胶质瘤细胞;C6 牛载脂蛋白B100(apo-B100)ELISA 试剂盒 PEPT1 (Peptide-transporters 1) 肠道肽转运蛋白(小肽转运蛋白)多肽 0.5mg

JAK2： 蛋白质酪酸激酶JAK2抗体 ICAM1 Others Mouse 小鼠 ICAM-1 / CD54 人细胞裂解液 (阳性对照)

人肾系膜细胞cDNAHRMC cDNA 牛孕激素/孕酮(PROG)ELISA 试剂盒 PTEN/MMAC1 一种抑制基因抗原 0.5mg

NRK-49F正常大鼠肾细胞Hacat 人永生化角质细胞 大鼠Wolfram综合征蛋白1(WFS1)ELISA试剂盒 Human hypothetical protein LOC677340  人假定蛋白LOC677340 96T

RNF12： 环指蛋白12抗体 SH-77细胞，小细胞肺癌 人T细胞白血病细胞,T-CEM细胞 人T淋巴瘤转基因细胞;Jurkat D,E

EPHA4 Others Human 人 EPHA4 人细胞裂解液 (阳性对照) 大鼠WAP四二硫化物核心域蛋白1(WFDC1)ELISA试剂盒 Human hypothetical protein LOC433328  人假定蛋白LOC433328 96T

RNF113B： 环指蛋白113B抗体 罗猴胎肾细胞;MA104

CM-R115大鼠小梁网细胞培养基100mL 大鼠V-Rel网状内皮增生病毒癌基因同源物A(RELA)ELISA试剂盒 MYD88(Human myeloid differentiation primary response gene 88)  人髓样分化因子初次应答基因88 96T