公司产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断！

1、细胞传代：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次；

2）添加 0.25%消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入 5ml 培养

液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min；

3）弃上清，沉淀细胞用 1-2ml 培养基重悬，然后按 1:2 比例进行分瓶传代，最后放入 37℃，5%CO2细胞

培养箱中培养；

2、细胞冻存：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次；

2）添加 0.25%消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入培养液终

止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min；

3）用适量的冻存液（FBS：DMSO=9 ：1）重悬细胞，并放置于冻存管中；

4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h 后转入液氮中进行长期保存。使用程序

降温盒可直接放入-80℃。

二、细胞培养操作

1) 复苏细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2) 细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-2 min（视细胞情况而定），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3) 细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例；a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

公司正在出售的产品：

SW480-EGFP-puro [SW480-pSB4](慢病毒构建稳定株)人结肠腺癌细胞 SW480-EGFP-puro [SW480-pSB4] (leiviral consuct stable sain) of human colon adenocarcinoma cells 1640+10% FBS+2μg/ml puromycin 大鼠前列腺素F合成酶(PGFS)ELISA试剂盒 C3  大鼠补体蛋白3 96T

Phospho-NDRG1 (Thr346)： 0酸化分化相关基因NDRG1抗体 IL1R1 Others Human 人 IL1R1 / CD121a 人细胞裂解液 (阳性对照)

CM-H108人表皮黑色素细胞培养基100mL 大鼠前列腺素F2α受体(PTGFR)ELISA试剂盒 Ag-NORs(Human Argyrophilic nucleolar organizer region proteins)  人核仁形成区嗜银蛋白 96T

NEDD4L： 泛素连接酶NEDD4-2抗体 大鼠肾小球系膜细胞;HBZY-1

人少突胶质前体细胞(HOPC-os)(悬浮生长) 人间充质干细胞-脐带 U251人胶质瘤细胞 大鼠前列腺素F2α(PGF2α)ELISA试剂盒 ACTH(mouse adrencocorticotropic hormone)  小鼠促肾上腺皮质激素 96T

人结肠平滑肌细胞总RNAHCSMC NA 犬转移生长因子β1(TGF-β1)ELISA 试剂盒 HSP-27(Heat Shock Protein 27) 热休克蛋白-27(抗原) 0.5mg

IL-20RB： 白介素20受体β链抗体 人结直肠腺癌细胞;Caco-2

U-937(人组织细胞淋巴瘤细胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠淋巴瘤细胞;EL4 犬转化生长因子β1(TGF-β1)ELISA 试剂盒 HSP-90Alpha(Heat Shock Protein 90Alpha ) 热休克蛋白90α(抗原) 0.5mg

IAA： 吲哚乙酸抗体 肠静脉内皮细胞Many types of cells包装：5 × 105次方(1ml)

EFNB2 Protein Canine 重组狗 Ephrin-B2 / EFNB2 蛋白 (His 标签) 犬主要组织相容性复合体(MHC/DLA)ELISA 试剂盒 HSP-90 Beta (heat sock protein-90 Beta) 热休克蛋白-90β (抗原) 0.5mg

TCMK-1小鼠肾小管上皮细胞RPL15： 核糖体蛋白L15抗体 FCGR3A Others Human 人 CD16a / FCGR3A 人细胞裂解液 (阳性对照)

髓核细胞培养基NPCM-prf 大鼠β内啡肽受体(β-EPR)ELISA试剂盒 LEPR(Human Leptin Receptor)  人瘦素受体 96T

RLBP1L1： 结合蛋白1抗体 22RV1(人前列腺癌细胞) 5×106cells/瓶×2

EB病毒转化的人B淋巴细胞;KMY0901 人真皮淋巴上皮细胞培养基 100mL 大鼠β内啡肽受体(β-EPR)ELISA 试剂盒 AT2R(Human Angiotensin II Receptor 2)  人血管紧张素Ⅱ受体2 96T

RBBP6： 视网膜母细胞瘤结合蛋白6抗体 CL-0311293E(人胚肾细胞(EBNA1基因修饰))5×106cells/瓶×2

三、培养注意事项 

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象 发生请及时和我们联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需 细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由 客户自行承担。

3. 用 75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度 变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将 T25 瓶置于 37℃培养箱放置 2-4h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm 离心 3 min，弃上 清。加 5 mL PBS 重悬细胞，再 900 rpm-1000 rpm 离心 3 min，用新鲜的培养基重悬 细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通 交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞 的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基 (灌液培养基) 不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培 养条件新配制的培养基来培养细胞。     收到细胞后第一次传代建议 1：2 传代 。

9. 注意：  1:2 传代就是 1 个 T25 瓶传 2 个 T25 瓶或者 2 个 6cm 皿。不是 1 个 T25 瓶传 2 个10cm 皿。