公司产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断！

1、细胞传代：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次；

2）添加 0.25%消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入 5ml 培养

液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min；

3）弃上清，沉淀细胞用 1-2ml 培养基重悬，然后按 1:2 比例进行分瓶传代，最后放入 37℃，5%CO2细胞

培养箱中培养；

2、细胞冻存：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次；

2）添加 0.25%消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入培养液终

止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min；

3）用适量的冻存液（FBS：DMSO=9 ：1）重悬细胞，并放置于冻存管中；

4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h 后转入液氮中进行长期保存。使用程序

降温盒可直接放入-80℃。

二、细胞培养操作

1) 复苏细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2) 细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-2 min（视细胞情况而定），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3) 细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例；a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

三、培养注意事项 

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象 发生请及时和我们联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需 细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由 客户自行承担。

3. 用 75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度 变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将 T25 瓶置于 37℃培养箱放置 2-4h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm 离心 3 min，弃上 清。加 5 mL PBS 重悬细胞，再 900 rpm-1000 rpm 离心 3 min，用新鲜的培养基重悬 细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通 交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞 的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基 (灌液培养基) 不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培 养条件新配制的培养基来培养细胞。     收到细胞后第一次传代建议 1：2 传代 。

9. 注意：  1:2 传代就是 1 个 T25 瓶传 2 个 T25 瓶或者 2 个 6cm 皿。不是 1 个 T25 瓶传 2 个10cm 皿。

公司正在出售的产品：

人海马趾神经细胞(HN-h)(1×106) 人间充质干细胞-脂肪 HGC-27人胃癌细胞 大鼠潜伏转化生长因子结合蛋白1(LTBP1)ELISA试剂盒 SP-A  大鼠肺表面活性物质相关蛋白A 96T

NADPH oxidase 4： NADPH氧化酶4抗体 豚鼠心肌细胞;GP-H1

IL17A Protein Mouse 重组小鼠 IL17 / IL17A 蛋白 大鼠前心肽(Pro-ANP)ELISA试剂盒 DPD(Mouse deoxypyridinoline)  小鼠脱氧酚/脱氧啉 96T

FAD24： 脂肪细胞分化因子24 0.2ml

Rhesus antibody Rh GNRPX/PLEKHJ1 鸟核苷酸结合蛋白X抗体 FES Others Human 人 FES Kinase / Feline sarcoma oncogene 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照)

EFNB2 Protein Canine 重组狗 Ephrin-B2 / EFNB2 蛋白 (Fc 标签) 人11去氢血栓烷B2(11-DH-TXB2)ELISA 试剂盒 HHV8/ORF K2/vIL-6(Human herpesvirus 8) 人类疱疹病毒8抗原 0.5mg

IDE： 胰岛素降解酶抗体 PTPRC Others Mouse 小鼠 CD45 / PTPRC (aa 453-1152) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照)

人骨骼肌细胞培养基 100mL 人11β羟基类固醇脱氢酶(11β-HSD)ELISA试剂盒 HIF-1Alpha 缺氧诱导因子1α 多肽 0.5mg

IKK beta： KB抑制蛋白激酶β抗体 人脑血管平滑肌细胞 人肺癌细胞，NCI-H1703[H1703]细胞 Hepa 1-6(肝癌细胞)

BST1 Others Rat 大鼠 CD157 / BST1 人细胞裂解液 (阳性对照) 人1,5-脱水葡萄糖醇/1,5-脱水山梨(1,5-AG)ELISA 试剂盒 histone H3-like protein 组蛋白H3样蛋白多肽 0.5mg

STC-1小鼠小肠内分泌细胞内皮细胞生长添加物ECGS 大鼠β-血小板球蛋白(βTG)ELISA试剂盒 GBM(Human glomerular basement membrane antibogy)  人抗肾小球基底膜抗体 5637(人膀胱癌细胞) 5×106cells/瓶×2

EB病毒转化的人B淋巴细胞;KMYB 人椎间盘髓核细胞培养基 100mL 大鼠β细胞素(βTC)ELISA试剂盒 BMG/ Beta2-MG(Human Beta2-microglobulin)  人β2微球蛋白 96T

RGMA： 反义导向分子RGMA抗体 CL-0327Calu-6(人肺退行性癌细胞)5×106cells/瓶×2

hDPSCs, 人前磨牙牙髓干细胞 大鼠β细胞素(BTC)ELISA试剂盒 ANX- V (Human Annexin V )  人膜联蛋白Ⅴ 96T

Repulsive Guidance Molecule B： 反义导向分子RGMB抗体 FRZB Others Human 人 FRZB / sFRP-3 人细胞裂解液 (阳性对照)