猪TH细胞（TH）酶联免疫分析试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：96T

30ng/L -1600 ng/L

使用目的：

本试剂盒用于测定猪血清、血浆及相关液体样本中 TH细胞（TH）含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中猪 TH细胞（TH）   。用纯化的猪 TH细胞（TH）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入 TH细胞（TH），再与   HRP标记的 TH细胞（TH）抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在 HRP  酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成黄色。颜色的深浅和样品中的 TH细胞（TH）呈正相关。用酶标仪在  450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中猪 TH细胞（TH）浓度。

试剂盒组成

猪TH细胞（TH）酶联免疫分析试剂盒标本要求

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含NaN3的样品，因   NaN3抑制辣根过（HRP）活性。

操作步骤

1.  标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2.  加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50µl，待测样品孔中先加样品稀释液 40µl，然后再加待测样品 10µl（样品稀释度为 5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 温育：用封板膜封板后37℃温育30分钟。

4. 配液：将 30倍浓30倍稀释后备用

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静30秒后弃去，如此重复 5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50µl，空白孔除外。

7. 温育：操作同 3。

8. 洗涤：操作同 5。

9. 显色：每孔先加入显色剂 A50µl，再加入显色剂 B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.

10. 终止：每孔加终止液    50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止液后 15分钟以内进行。

猪TH细胞（TH）酶联免疫分析试剂盒操作程序总：

计算

以标准物的浓度为横坐标， OD值为纵坐标，在坐标纸上，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与  OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

猪TH细胞（TH）酶联免疫分析试剂盒注意事项

1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会有析出，稀释时可在浴中加温助溶，洗涤时不影响。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在 5分钟内，如标本数量多，*使用排枪加样。

4．请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本  OD值大于标准品孔 OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请乘以总稀释倍（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉。

6．底物请避光保存。

7．严格按照说明书的操作进行，试验.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：2-8℃。

2．有效期：6个月