DEAE-Dextran细胞转染试剂盒
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DEAE-Dextran细胞转染试剂盒产品简介:
外源基因导入真核细胞的方法有很多种,如磷酸钙转染法、DEAE-葡聚糖(Dextran)转染法、脂质体法、电穿孔法、显微注射法等。DEAE-葡聚糖转染法的原理是带正电荷的DEAE-葡聚糖与带负电的核酸的磷酸骨架相互作用,形成复合物,该复合物通过细胞内吞噬作用使DNA转导进入细胞核。
DEAE-Dextran细胞转染试剂盒(DEAE-Dextran Cell Transfection Kit)适用于瞬时转染(transient tranfection),不宜用于筛选稳定表达细胞株,这是因为DEAE-dextran在较高浓度作用较长时间会对细胞产生一定毒性。*的加入可以抑制溶酶体对外源DNA的降解,从而提高转染效率。但对于具体的细胞、具体的培养条件,如需获得更加理想的转染效率,须自行摸索上述各种转染方法,找出优化的转染方法。CHO、DUKX、BⅡ等细胞也可以通过甘油、DMSO进行热休克处理以提高转染效率。
DEAE-Dextran细胞转染试剂盒注意事项:
注意无菌操作,尽量避免污染,同时DNA不应含有蛋白和酚。
休克处理某些细胞系会使转染效率大大提高,但应注意甘油暴露过久易导致细胞死亡。
转染12~24h后,可以加入终浓度为10mmol/L的钠溶液,可以提高病毒滴度。
如果转染效率低下,有可能是过多细胞死亡所致,应考虑减少DEAE-Dextran的用量或作用时间,或者减少*作用时间。
支原体污染细胞,易导致转染不稳定。