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订购产品参数:
产品名称:隐袭腐霉PCR检测试剂盒
英文名称:Pythium insidiosumPCR
试剂盒准备物品:
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀释液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
产品说明书 1份
反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。
操作隐袭腐霉PCR检测试剂盒注意事项说明:
1. 实验严格按照说明书的操作进行,实验结果判定必须以酶标仪读数为准。
2. 酶标包被板开封后如未用完,应立即装入密封袋中加干燥剂保存。
3. 建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测,取平均值,以减小实验误差。
4. 为避免交叉污染,标准品、样本和空白对照每加一个就要更换一次吸头;酶标工作液、*和底物等公共组分,要悬臂加样,不得碰到微孔;不得重复使用封板膜。
实验的基本操作流程
A 包被ELISA板子或使用商品化ELISA板
B 让标本中的抗原/抗体与固相载体上的抗体/抗原结合,形成固相复合物。
C 根据颜色反应的程度进行抗原/抗体的定性或定量。
隐袭腐霉PCR检测试剂盒有关*精品如下:
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幼虫芽胞杆菌PCR检测试剂盒
库皮科斯病毒PCR检测试剂盒
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