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西安市牙科医院污水处理设备生产型号配置

 实验室AO反应器流程图

　　1.2 DNA提取及PCR扩增

　　DNA提取采用PowerSoil® DNA Isolation Kit试剂盒，按照试剂盒流程提取DNA。以所提取各样品DNA为模版，对其16S rDNA V4区扩增。反应体系为30 μL，上游引物为EUb341f：5′-cctacgggaggcagcag-3′，下游引物为Eub907r：5′-ccgtcaattcctttgagttt-3′。PCR扩增管中添加DNA模板0.5 μL，正反向引物各0.6 μL，灭菌水22.4 μL，dNTP 2.4 μL，3 μL缓冲液，ExTaq酶0.5 μL。PCR反应程序：先94 ℃预变性10 min，然后进行30个循环(94 ℃变性1 min，55 ℃退火1 min，72 ℃延伸1 min)，后72 ℃延伸10 min。

　　扩增结束后，运用1%琼脂糖凝胶电泳对PCR产物进行检测，使用Axyprep DNA凝胶回收试剂盒(AXYGEN)切胶回收DNA。PCR扩增后的条带亮度明显，位置清晰，可直接用于后续测序分析。委托北京理化分析测试中心进行Illumina MiSeq高通量测序。

高通量测序数据分析

　　本研究采用Illumina MiSeq PE2 × 125测序方法进行测序。测序数据下机后，根据Barcode拆分不同样本数据，并去除Barcode序列及引物序列，利用FastQC对序列进行质量控制。使用FLASH(v1.2.7，ccb.jhu.edu/software/FLASH/)根据overlap拼接Miseq双端测序数据，拼接成功率控制在90%以上。利用QIIME(1.8，qiime.org/)过滤低质量序列，利用UCLUST对获得的高质量序列进行操作分类单元(OTU)划分，97%作为相似性阈值，并将获得的OTU与SILVA非冗余度0.9的16S序列数据库比对，获得各OTU代表序列的分类信息。基于OTU的聚类结果，使用QIIME(1.8，qiime.org/)软件计算各个样本α多样性，以反映本次测序深度、物种均匀性等，并根据注释结果，计算样本间距离矩阵，进行PCA可视化。利用ANOVA(analysis of variance)方法计算污水厂与反应器中门和纲水平上物种注释的丰度差异情况。利用冗余分析(RDA)解析微生物与环境因子的相关性。实验设计原始数据上传NCBI网zhan，数据项目编号(BioSample accession)为SAMN08107549。

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