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Super Fluor 680 琥珀酰亚胺酯
Super Fluor 680 琥珀酰亚胺酯
1 mg | ¥2,000 |
5 mg | ¥4,680 |
1.4.3.1 装填柱层析分离吸附柱
1) 提前用去离子水浸泡葡聚糖Sephadex过夜(1g 配5mLH2O),使其溶胀,打开孔状结构。
2) 湿法装柱:装填过程中确保PBS(10mM, pH=7.4)液面比Sephadex高,以防混入空气而产生气泡。先在柱子(13×100mm)内注入3/4左右的PBS,而后加入Sephadex /PBS溶液;分批次、缓慢加入柱子内,后用塑料滴管吸取,沿着柱子四壁旋转,逐步、缓慢地加入,装填至近满,留下约3cm的空间以待注入荧光标记蛋白溶液。
3) 在装填的整个过程中打开活塞(淋出液用大烧杯承接),同时用玻璃棒+橡胶塞从下到上轻轻敲打柱子,使Sephadex装填紧密,注意使柱子内不得有气泡,不得有断层,使柱子竖直,确保顶部端面水平;故滴加Sephadex时应旋转加入,不得直接滴加,以免激起柱顶层。
4) 装填完柱子后,用塑料滴管吸取PBS,沿管口四壁旋转着缓慢加入,使PBS过一遍柱子,而后将PBS注入Sephadex顶部,以隔绝空气,以免在柱内产生气泡,关闭末端活塞。
1.4.3.2 过柱层析分离吸附柱(避光)
1) 打开柱子末端活塞,缓慢放出柱子顶层的PBS,待PBS液面刚与Sephadex柱子端面相平时,立即关闭活塞;注意:不要使PBS液面低于Sephadex柱子端面,以免混入空气而在柱子内产生气泡;立即用塑料滴管吸取荧光蛋白溶液,沿柱子四壁旋转缓慢加入(全部加完)。不要搅动Sephadex ,随时保持其端面水平。