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1. 产品描述:
Super ECL Plus超敏发光液用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶HRP的抗体及其关联的抗原。由于采用了*的发光底物系统,Super ECL Plus超敏发光液是目前灵敏的商业化荧光ECL检测试剂:
(1)具有*灵敏度和高信噪比,可检测10~100 fg抗原;
(2)可在日光灯下进行发光操作;
(3)发光迅速,荧光可使X光胶片感光达12小时以上,特别适用于痕量蛋白或核酸检测;
(4) 可使用更高的抗体稀释倍数(1:2000~1:10000),极其节省抗体。
2. 用途:用于HRP标记抗体的Western Blot和HRP标记探针的核酸杂交。
3. 使用方法:
(1)执行常规SDS-PAGE、转膜和Western Blot步骤。注意用HRP标记lgG或用一抗-链亲和素-生物素-HRP夹法。
(2)Western Blot后一次洗膜的同时新鲜配制发光工作液:分别取等体积的溶液A和B,放入干净容器中混合。建议立即使用工作液,室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。
(3)用镊子取出膜,搭在滤纸上沥干洗液但勿使膜*干燥。将膜*浸入发光工作液(0.125mL发光工作液/cm2膜)中,与发光工作液充分接触。室温孵育3分钟,准备立即压片曝光。孵育时间过长不会增加灵敏度,有时还会导致曝光条带异常。发光过程的本质是酶促反应,使用过少的发光工作液不利反应进行,也会导致膜上条带曝光不均和明显降低灵敏度。为达节约目的可将膜剪小但勿降低发光液用量。
(4)用镊子夹起膜,搭在滤纸上沥干发光工作液。但勿洗去发光液。
(5)打开X光胶片暗盒,在暗盒内表面铺一张面积大于膜的保鲜膜。将Western Blot膜贴在保鲜膜上,将保鲜膜折起来*包裹Western Blot膜,去除气泡和皱褶,可剪去边缘部多余的保鲜膜。用滤纸吸去多余的发光工作液。用胶带将覆盖Western Blot膜的保鲜膜固定在暗盒内,蛋带面向上。
(6)暗房内压X光胶片,分别曝光不同的时间如数秒到数分钟。显影冲洗。
4. 储存:4℃密封避光保存一年以上。短期可放置室温。
5. 安全性:无特殊毒性,按普通化学品处理。