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活性氧(reactive oxygen species , ROS)是体内一类氧的单电子还原产物,,是电子在未能传递到末端氧化酶之前漏出呼吸链并消耗大约2 %的氧生成的,包括氧的一电子还原产物超氧阴离子(O2·-)、二电子还原产物过氧化氢(H2O2)、三电子还原产物羟基自由基(·OH)以及一氧化氮等。
活性氧(ROS)测试盒实验原理
活性氧(Reactive oxygen species, ROS)包括超氧自由基、过氧化氢、及其下游产物过氧化物和羟化物等,参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。采用DCFH-DA(2,7-dichlorofuorescin diacetate)是迄今zui常用、zui灵敏的细胞内活性氧检测探针。DCFH-DA 没有荧光,进入细胞后被酯酶水解为 DCFH(dichlorofluorescin)。在活性氧存在时 DCFH被氧化为不能透过细胞膜的强绿色荧光物质 DCF(dichlorofluorescein),其荧光在激发波长502nm,发射波长 530nm 附近有zui大波峰,强度与细胞内活性氧水平成正比。此活性氧检测系统本底低,灵敏度高,重复性好,操作简便。工作波长:*激发波长 500、485(500±15nm),*发射波长 525 (530±20 nm)。也可按照 FITC荧光检测条件检测。
实验原理
活性氧检测试剂盒(ReactiveOxygenSpeciesAssayKit)是一种利用荧光探针DCFH-DA
进行活性氧检测的试剂盒。DCFH-DA本身没有荧光,可以自由穿过细胞膜,进入细胞内后,可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透细胞膜,从而使探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。检测DCF的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平。
本试剂盒提供了活性氧阳性对照试剂Rosup,以便于活性氧的检测。Rosup是一种混合物(compoundmixture),浓度为50mg/ml。