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甘油三酯含量测定试剂盒说明书
规格:100管/96样 微量法
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
TG是长链脂肪酸和甘油形成的脂肪分子,不仅是细胞膜的主要成分,也是重要呼吸底物。
测定原理:用异丙醇抽提取TG,KOH皂化TG后水解生成甘油及脂肪酸,过点酸氧化甘油生成甲醛,在氯离子存在下甲醛与乙酰丙酮缩合生成黄色物质,在420nm有特征吸收峰,其颜色的深浅与TG含量成正比。
自备实验用品及仪器:可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、水浴锅、可调式移液枪、双蒸水
试剂组成和配置:试剂一:液体60mL×2瓶,4℃保存。
试剂二:液体5mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:液体6mL×1瓶,4℃保存。
试剂四:液体2mL×1瓶,4℃避光保存。
试剂五:液体6mL×1瓶,4℃避光保存。
试剂六:液体6mL×1瓶,4℃避光保存。
标准品:液体1mL×1支,1mg/mL标准甘油三酯溶液,4℃避光保存。
TG的提取:
1、组织中TG的提取:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆,8000g,4℃离心10min,取上清,即TG待测液。
2、细胞、细菌中TG的提取:先收集400-500万细胞或细菌到离心管内,弃上清,加1mL试剂一,超声波破碎1min(强度20%,超声2s,停1s),8000g,4℃离心10min,取上清,即TG待测液。
3、血清(浆)样品:直接测定。
测定操作:
1.可见分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长到420nm,蒸馏水调零。
2.水浴锅预热到65℃。
3.甘油三酯含量测定:
待冷却后,置于微量石英比色皿/96孔板测定420nm处吸光值,记为A空,A标和A测。
注意:空白管和标准管只需测定一次。