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产品信息
货号 | 名称 | 规格 | 价格 |
wb30310-25ku | Benzonase Nuclease 全能核酸酶 | 25KU | 980 |
wb30310-50ku | Benzonase Nuclease 全能核酸酶 | 50 KU | 1600 |
wb30310-100ku | Benzonase Nuclease 全能核酸酶 | 100 KU | 2800 |
wb30310-200ku | Benzonase Nuclease 全能核酸酶 | 200 KU | 5000 |
产品简介：
本产品由经基因工程改造的真核生物酵母菌表达纯化所得，不含原核生物表达体系自身的细菌内毒素，不仅应用在科研研究中，作为培养细胞上清和细胞裂解液去粘度的酶制剂，去除核酸干扰提高后续蛋白纯化或功能研究；而且应用在疫苗工业、蛋白和多糖类制药工业，去除宿主残留核酸，大大降低疫苗和蛋白类产品核酸污染至皮克级别，提高制品生物功效。
本品以无菌液体酶的形式提供，储存于缓冲液（20mM Tris-Cl pH8.0，2mM MgCl2，2mM NaCl，50%甘油）中，无色透明液体。
全能核酸酶作用条件
条件参数 | 适条件 | 可作用条件 |
Mg2+ | 1-2 mM | 1-10 mM |
pH | 8.0-9.2 | 6.0-10.0 |
Temp | 37℃ | 0-42℃ |
DTT | 0-100 mM | >100 mM |
β-Mercaptoethanol | 0-100 mM | >100 mM |
Monovalent cation（Na+，K+） | 0-20 mM | 0-150 mM |
PO43- | 0-10 mM | 0-100 mM |
注：1）适条件为全能核酸酶释放≥90%活力的条件，可作用条件为全能核酸酶释放≥15%活力的条件；2）全能核酸酶活力定义为在37℃，pH 8.0反应条件，2.625 mL反应体系中，在30 min内使△A260吸收值变化1.0（相当于*消化37 μg鲑鱼精DNA成为寡核苷酸）所用的酶量定义为一个活性单位（U）。
产品性质
英文别名（English Synonym） | BenzNuclease; Universal Nuclease; Benzonase endonuclease |
CAS号（CAS NO.） | 9025-65-4 |
分子量（Molecular Weight） | 27.9 kDa |
纯度（Purity） | ≥90%（SDS-PAGE） |
酶活（Enzyme Activity） | ≥250 U/μL |
比活（Specific Activity） | ≥1.0×106 U/mg蛋白 |
蛋白酶（Protease） |
|
内毒素（Endotoxin） | Undetected（鲎试剂法） |
适pH（Optimum pH） | 8.0（工作范围 |
适温度（Optimum Temperature） | 37℃（工作范围0-42℃） |
辅助因子（Cofactor） | 1-10 mM Mg2+ |
储存缓冲液（Storage Buffer） | 20 mM Tris-Cl pH8.0，2 mM MgCl2，2 mM NaCl，50%甘油 |
稀释缓冲液（Dilution Buffer） | 20 mM Tris-Cl pH8.0，2 mM MgCl2，2 mM NaCl |
活性单位定义（Unit Definition） | 在37℃，pH 8.0反应条件，2.625 mL反应体系中，在30 min内使△A260吸收值变化1.0（相当于*消化37 μg鲑鱼精DNA成为寡核苷酸）所用的酶量定义为一个活性单位（U）。 |
使用方法
1）细胞处理：a.贴壁细胞去除培养基，用PBS洗后，1 mL RIPA裂解液（或其他哺乳动物细胞裂解液）加10-20 uL全能核酸酶，室温或冰上孵育5-30 min，收集裂解液，离心取上清即可进行下游实验。
b.悬浮细胞离心收集后，在离心管中加1 mL RIPA裂解液（或其他哺乳动物细胞裂解液）加10-20 uL全能核酸酶，室温或冰上孵育5-30 min，收集裂解液，离心取上清即可进行下游实验。
2）组织样品：将30-100 mg动物或者植物组织研磨充分后，加入100-200 uL裂解液，同时加入加5-10 uL全能核酸酶，室温或冰上孵育5-30 min，收集裂解液，离心取上清即可进行下游实验。
3）大肠杆菌或者其他细菌：细菌离心收集后，用裂解液裂解或者研磨破碎后，每1 mL加1-5 uL全能核酸酶，室温孵育30 min，收集裂解液，离心取上清即可进行下游实验。
注：若溶液为高盐溶液，偏酸性或者偏碱性，含有较高浓度的去垢剂、变性剂，应适当增加酶量或孵育时间。
运输和保存方法
冰袋运输。-20℃保存，有效期2年。若是打开包装后并4℃放置超过一周，建议过滤除菌防止微生物污染。
注意事项
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操
常见问题：
Q. 产品应如何稀释？
A：正常建议稀释比例(终浓度)为1:1000-1:20000，其中时间、温度、稀释比例为影响反应的正面因素。
Q. 产品能否可以减少用量？
A：如希望减少用量，可酌情提高反应温度或延长时间。
Q. 使用该产品进行消化反应的抑制因子有哪些？
A：在含有以下物质的体系中，全能核酸酶的活性会降低50%或以上：>150 mM一价阳离子，>100 mM磷酸盐，>100 mM硫酸铵，>100 mM盐酸胍，>0.1% SDS，>1% Triton X-100，>1% Tween 20。
Q. 怎样灭活全能核酸酶？如何去除？
A：采用EDTA螯合金属离子会可逆地抑制全能核酸酶活性，条件会造成不可逆失活，例如100 mM NaOH，70℃处理30 min等。全能核酸酶可采用阴离子交换柱或气相色谱法从目的产物中分离出去。
Q. 全能核酸酶与蛋白酶抑制剂混合物是否兼容？
A：全能核酸酶与不含EDTA的蛋白酶抑制剂混合物兼容。若含有EDTA且浓度>1 mM时，会抑制核酸酶活性，建议：如果必须加EDTA，按照2倍EDTA浓度补加Mg2+。
Q. 产品的用量是多少？
A：需要根据重悬菌体所需裂解液的体积来确定需要酶的量。若普通蛋白纯化，则需要浓度为25 U/mL；核蛋白则需要100 U/mL；病毒表达蛋白纯化需要浓度为12.5 U/mL；疫苗产品需要量为0.9-1.1 U/mL。
Q. 产品的稳定性如何，如果不小心在室温放置几天后，酶活性会受到怎样的影响？
A：室温2-3天，对活力影响不大。
Q. 全能核酸酶能在尿素环境消化核酸吗？
A：全能核酸酶在尿素浓度为6 M时活性先增加，随着时间延长活性又有降低；在尿素为7 M时，全能核酸酶15分钟后出现变性并失活。但是在酶失活前多数核酸已经降解了。可通过提高全能核酸酶使用浓度补偿7 M尿素的影响。
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