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Recombinant A33R
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¥2450双丙氨膦(Bialaphos,也称为Bilanafos)是由几种土壤链霉菌代谢产生的一种天然有机磷三肽抗生素,结构上由两个L-bingansuan残基和一个guansuan类似物草丁膦(phosphinothricin,PPT;也称为glufosinate)组成。一旦进入正常细胞(不含抗性基因),其内的肽酶水解双丙氨膦,释放草丁膦化合物,从而抑制正常氮代谢和导致胞内氨累积,破坏guanxianan合成酶(glutamine synthetase,GS)相关的各种代谢活动,zui终杀死细胞。双丙氨膦不仅是一种广谱除草剂,还能强效抑制革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌、和一些真菌类植物 病原菌生长。
产品应用:
植物基因工程研究(筛选标志)作用机理:双丙氨膦可用在许多植物物种(包括小麦,大麦,黑麦,燕麦,水稻和玉米)的转化实验,用来筛选含bar基因(from Streptomyces hygroscopicus)或pat基因(from Streptomyces viridochromeogenes)的转基因工程细胞系,这两种基因都能编码草丁膦N-乙酰转移酶(phosphinothricin N-acetyltransferase),使其转化成为一种无GS抑制活性的化合物,从而使得细胞对双丙氨膦和草丁膦产生抗性。转基因玉米研究,双丙氨膦比草铵膦的活性更强;转基因小麦研究,双丙氨膦是zui可靠的选择标准;酵母基因工程中,双丙氨膦逐渐成为重要的选择标准。
产品性质
中文别名(Chinese Synonym):双丙氨膦
英文别名(English Synonym) :Bialaphos,也称为Bilanafos
CAS号(CAS NO.) :71048-99-2
分子式(Formula) :C11H21N3O6P·Na
分子量(Molecular weight) :345.26 g/mol
外观(Appearance) :白色或浅棕色结晶性粉末
溶解性(Solubility) :溶于水(10mg/ml)
应用案例【转基因的小麦幼胚/愈伤组织筛选】(仅作参考):
1)使用草铵膦(PPT)或双丙氨膦进行转化细胞的筛选;
2)粒子轰击(bombardment)后将未成熟幼胚逐个转移到E3培养基,维持培养7-14天;
3)胚胎转移到含5µg/ml PPT(或双丙氨膦)的MSCB5培养基(*轮筛选用培养基),黑暗培养2周;于这2周内不能正常生长的愈伤组织直接扔弃。
4)用解剖刀将在MSCB5培养基上增殖的细胞簇解离,亚克隆,转移到含有10 µg/ml PPT(或双丙氨膦)的MSCB10培养基,维持培养4周。
5)在含5µg/ml或10µg/ml PPT(或双丙氨膦)的培养基上筛选过程的持续周期约为50-75天。将所有培养物放到植物生长培养箱内,设置25 °C,黑暗培养。每一个转基因愈伤组织在含有筛选标志的培养基上zui终生长为大量的胚性愈伤组织。
6)设置1-10µg/ml PPT(或双丙氨膦)的梯度浓度来测试未转化愈伤组织,以建立更加有效的筛选系统。每一次实验大概准备20个目标培养平板。2个为对照,1个在N6C1上生长以监测培养物的健康情况,另1个在含5-10µg/ml双丙氨膦的N6C1上生长以验证未转化细胞对选择标志的反应。
【注意】:转基因小麦愈伤组织的选择实验中双丙氨膦是有效的筛选标志,然而双丙氨膦不能杀死未转化细胞。为了得到理想的筛选效果,建议低密度(大概每个平板上10个未成熟幼胚)亚培养粒子轰击后的细胞。
运输和保存方法
-20℃长期保存,冰袋运输。
注意事项
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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