Phleomycin是由Streptomyces verticillus（轮枝链霉菌）的突变株产生的一种糖肽抗生素，属于bolaimeisu(bleomycin)家族。Phleomycin可结合并插入DNA，破坏其双螺旋结构的完整性，Phleomycin在细菌、真菌、酵母、植物细胞和哺乳动物细胞上均能发挥活性，用于筛选携带Sh ble基因的转染细胞，可用于对Zeocin不敏感的细胞。

Warbio公司以20mg/ml的无菌溶液形式提供，可直接用于细胞培养，在0.1-50μg/ml浓度范围内，腐草霉素可以抑制大多数好氧细胞的生长。

产品性质

分子式（Formula）：C55H85O21N20S2Cu-HCl

Cas: 11006-33-0

分子量（Molecular Weight）：1525

外观（Appearance）：蓝色粉末或蓝白色混合粉末

纯度（Purity）：>90%(HLPC)

浓度：溶于水(20 mg/ml)和甲醇

应用参考浓度：

1大肠杆菌

携带bleomycin抗性基因如Sh ble，Tn5的质粒，一旦转化进入大肠杆菌受体菌如HB101， DH5a， MC1061，赋予其腐草霉素抗性。

腐草霉素抗性的转化子可以在添加5 μg/ml Phleomycin的低盐LB琼脂培养基（Yeast extract 5g/L, Tryptone 10g/L, NaCl 5g/L, Agar 15 g/L, pH 7.5）中进行筛选。加有腐草霉素的平板可于4℃稳定保存1个月。

2酵母菌

酿酒酵母的腐草霉素抗性转化子可在添加10 μg/ml Phleomycin的YEPD培养基中进行筛选。

操作步骤：按常规方法进行酵母细胞转化，一旦DNA进入细胞后，用YEPD培养基稀释细胞并置于摇床上培养6h或过夜，使其抗性性状得以表达。之后将细胞冰浴1h并涂布培养在添加10 μg/ml Phleomycin的YEPD（pH 7.0）固体培养基上。

3真菌

根据转化子对Phleomycin 的敏感性不同，在添加有10-50 μg/ml腐草霉素的再生培养基内进行筛选。先将细胞在4℃孵育过夜然后置于生长温度培养，可提高其对抗生素的敏感性。

4 植物细胞

根据植物类型不同，选择5-25 μg/ml Phleomycin进行转化子筛选。

5 哺乳动物细胞

5-50 μg/ml Phleomycin，推荐先通过建立灭杀曲线来确定浓度。与G418做比较，可能需要更长的时间来杀死细胞或者使细胞从平板上脱落，尤其当细胞处于高密度的情况。

依细胞系不同，通常需要5~21天来挑选具腐草霉素抗性的稳定转染细胞。

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注意事项：

1）腐草霉素对浓酸较为敏感，但可短时间暴露于稀酸中。使用前将本品回温至室温，并轻轻混匀。

2）腐草霉素有毒，避免直接接触皮肤，不可吞服。酸性或碱性pH，或次ling酸钠中会即刻失效。

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【注1】细胞对腐草霉素的敏感性受pH值影响，如pH值越高，敏感性越高；另外，对于高渗透压培养基如原生质体再生用的培养基，腐草霉素的活性会明显降低2-3倍。因此也可能通过使用低盐培养基来降低腐草霉素使用量。

【注2】使用前需将低温存放的腐草霉素置于室温回温，之后低速充分混匀

运输与保存

4°C或-20°C保存1年，避免反复冻融。