钙测量对于许多生物学研究至关重要。显示结合钙后光谱响应的荧光探针使研究人员能够使用荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离钙浓度的变化。在可见光激发钙指示剂中，Fluo-3和Fluo-4常用。Fluo-4是Fluo-3的类似物，其中两个氯取代基被氟取代，这导致488 nm处的荧光激发增加，因此荧光信号水平更高。通过将溶解的指示剂直接添加到含有培养细胞的培养皿中，可将这些钙指示剂的AM酯形式装载到细胞中。然而，Fluo-3 AM和Fluo-4 AM在酯酶水解后仅在活细胞中呈中等荧光，并且需要苛刻的细胞上样条件才能zui大化其细胞钙反应。已开发出Fluo-8®和Cal-520®钙染料，以改善细胞负载和钙响应，同时保持便捷的Fluo-3和Fluo-4光谱波长，在〜490 nm处具有zui大激发，在〜520 nm处具有zui大发射。

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