抗人生长因子（GF）抗体（HRP标记）说明书

首先感谢您选择深圳市优品生物科技有限公司，我司为您提供优质的免疫学试剂，在您使用本产品前，请认真阅读说明书，不清楚之处，请咨询技术人员解答，这对您顺利完成实验很有帮助。

名    称：抗人生长因子（GF）抗体（HRP标记）。

目 录 号：YP100113

亚    型：IgG

缓 冲 液：0.01mol/L的PBS、pH：7.2、0.2%Procline-300。

免 疫 原：人生长因子（GF）。

制备方法：取健康BALB/C小鼠单抗腹水。

纯化方法：亲和纯化。

标记方法：HRP偶联标记

应用范围：适用于ELISA、CLIA、WB、IHC、流式等实验。

产品纯度：不低于总蛋白的95%。

储存方法：存放在-20℃。

注意事项：避免反复冻融。

有效期限：请您在管体注明有效期内使用。

使用建议：本产品可以用于免疫学反应相关实验，更多信息请咨询技术人员。

抗人生长因子（GF）抗体（HRP标记）制备稳定分泌抗人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞系,并对其分泌的mAb进行鉴定。方法:用纯化后的hIGF-1重组蛋白免疫Balb/c小鼠,利用杂交瘤细胞融合技术制备抗hIGF-1的mAb,用Western blot法鉴定mAb的特异性,用间接ELISA法检测mAb腹水效价及mAb的亲和力,杂交瘤细胞染色体分析,鉴定Ig亚类。结果:获得2株能稳定分泌抗hIGF-1的mAb杂交瘤细胞系,Western blot分析显示,该mAb能与具有生物学活性的成熟IGF-1蛋白结合。腹水mAb效价可达6×104。mAb相对亲和力为2.1×109/mol～7.8×109/mol。2株单抗属IgM亚类。染色体分析符合杂交瘤细胞特征。结论:成功制备出抗hIGF-1的2株mAb杂交瘤细胞,为进一步用于hIGF-1的临床检测和实验研究创造了条件。制备抗人神经生长因子(nerve growth factor,NGF)的单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)，并对其生物学特性进行初步鉴定，为临床上的预防和治疗提供研究基础。 [方法]以人胎盘提纯的NGF作为免疫原，经皮下、腹腔免疫6～8周雌性Balb/c小鼠。采用B淋巴细胞杂交瘤技术，将免疫鼠的脾脏细胞与同系动物的骨髓瘤细胞sp2/0进行融合。运用酶联免疫吸附分析法(ELISA)对杂交瘤细胞的培养上清进行特异性抗体的检测。采用有限稀释法对阳性分泌孔的杂交瘤细胞进行多次筛选和克隆化培养，获取稳定分泌特异性mAb的杂交瘤细胞株。取生长良好的杂交瘤进行染色体的数目分析。快速定性试纸法鉴定单抗的类型。体内诱生腹水法进行单抗的制备。Protein G免疫亲和层析法进行单抗的纯化。以PC12为靶细胞，观察和分析抗人NGF单克隆抗体对该细胞生长状态的影响。 [结果]本研究获得两株可分泌特异性抗人NGF单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为1F6和5E4。其生物学特性：①两株细胞的染色体数目均为100以上，提示为杂交瘤细胞；②快速定性试纸法鉴定两株mAb均属小鼠IgG1亚类和κ型；③体内腹水诱生方法生产单克隆抗体，腹水形成的阳性率为90％，每只小鼠腹水的产量平均为8.0ml；④Protein G免疫亲和层析法纯化后，1F6和5E4杂交瘤细胞株的腹水抗体蛋白的含量分别为2.0mg／ml和1.5mg／ml；⑤ELISA法分析表明，腹水型单抗的效价均在1：1000以上；⑥经*体外传代培养，杂交瘤生长良好， 戎人禅经全浅因厂‘万6F少琪兑窟灰形功研御姿兰勿笋舟蹬时研男 分泌抗体的性能稳定;⑦实验表明，IF6和5E4可降低NGF促进PC12细胞突起伸 长的作用。 抗人生长因子（GF）抗体（HRP标记）。[结论]本研究己制备两株分泌抗人NGF功能性单克隆抗体的杂交瘤，该单 抗的研制为深入研究NGF的生物学功能提供了重要的手段。研制抗人NGF单克隆 抗体的关键环节是增强抗原的免疫原性、调整抗原的剂量、改变抗原的免疫途径、 保持骨髓瘤细胞SpZ/0的活力、稳定细胞融合温度、避免细胞污染等。经实验表 明，IF6和5E4单克隆抗体可降低NGF促进PC12细胞突起伸长的作用，具有抗NGF 的特性。 NGF在神经系统和非神经系统中具有广泛的生理作用，研制抗人NGF单克隆抗 体，在临床上具有重要的应用价值。本文已在实验室获得抗人NGF单克隆抗体， 并具有较好的生物学活性，但在临床上如何应用有待于进一步的深入研究。