光老化动物模型构建服务

一、光老化背景简介

皮肤衰老是一个由基因和外界环境因素等共同作用下的结果。皮肤老化根据影响因素的不同分为内源性老化和外源性老化。内源性老化是指基因层面的随着时间推移产生的自然老化。外源性老化是指环境因素如紫外线辐射、吸烟、毒害化学品等影响下产生的皮肤损害积累，其中紫外线辐射是导致外源性老化最主要的因素。因此，外源性老化又称为皮肤光老化。建立有效的皮肤光老化动物模型，是研究及防治人体皮肤光老化的基础。

二、光老化模型简介

皮肤光老化动物模型的设计思路主要是模拟真实的紫外照射情况。日光中的紫外线（ultraviolet，UV）分为3个波段：短波紫外线（UVC，190～290 nm）、中波紫外线（UVB，290～320 nm）和长波紫外线（UVA，320～400 nm）。其中UVC几乎全被臭氧层吸收，到达地面的主要为 UVA 和 UVB；UVA 的活性很低，而UVB活性是UVA活性的1000倍。UVB 主要导致皮肤表皮层和真皮浅层的损伤，可引起皮肤松弛、干燥、粗糙、皱纹加深、色素沉着等，甚至可以导致皮肤癌。因此皮肤光老化模型一般使用采用窄谱UVB（311～312 nm）作为紫外照射光源。

三、光老化动物模型构建服务的方法

1. 实验动物

10-12周雌性裸鼠

2. 实验设备

311nm的UVB紫外灯管（安装在自制紫外照射箱中，紫外灯距离小鼠背部约30cm）。紫外照度计用于监测 辐照度。

3.实验流程

造模时间共计八周，间隔一天进行紫外照射，流程如下表：

4.光老化模型鉴定

4.1 一般状态及皮肤宏观评价

隔日观察裸鼠的一般状态，如食量、精神状态等。同时，对裸鼠背部皮肤与光老化相关的宏观特征（如皱纹、增厚、粗糙、弹性、红斑等）进行观察评价，并对其背部皮肤进行拍照记录。根据下表所示皮肤光老化评分标准对其背部皮肤进行宏观评分。

4.2 皮肤弹性测试

根据 Tsukahara 等人建立的提皮测试方法对裸鼠皮肤弹性进行评价，每四周一次，共检查两次。用拇指和食指将裸鼠背部皮肤沿正中线靠后的位置轻轻提起（以裸鼠四肢不悬空为度）后立即放开，并记录皮肤恢复至初始状态的时间[8]。

4.3 皮肤组织学检测

4.3.1 HE 检测：表皮组织结构观察及厚度测量

皮肤组织经 HE 染色后，光学显微镜下观察皮肤组织角质层、表皮层和真皮层结构及细胞层数；观察毛囊、汗腺、皮脂腺等附属器官的形态；以及观察是否有出血现象及炎性细胞浸润等。

4.3.2 Masson 检测：胶原纤维的分布及形态观察

皮肤组织经 Masson 染色后，光学显微镜下观察显示胶原纤维呈蓝色，胞质、肌纤维和红细胞红色，胞核蓝褐色。观察胶原纤维的含量、形态及分布的变化情况。

四、小结：

选用311nm的UVB紫外线灯照射8周可以成功建立小鼠皮肤光老化模型。模型组小鼠的皮肤肉眼可见变红、松弛、粗糙、色素沉着、皱纹增加等； 病理观察可发现表皮增厚，胶原纤维含量减少， 排列紊乱等现象。

五、参考文献

[1]GARRE A, NARDA M, VALDERAS-MARTINEZ P, et al. Antiaging effects of a novel facial serum containing L-Ascorbic acid,proteoglycans,and proteoglycanstimulating tripeptide:ex vivo skin explant studies andin vivo clinical studies in women[J]. Clin Cosmet Investig Dermatol, 2018, 11:253-263.

[2]孔悦, 郭砚. 皮肤光老化小鼠模型的构建及效果评估[J]. 实验动物与比较医学, 2021, 41(2):6.

[3]吴斯敏, 杨慧龄. 紫外线引起皮肤光老化机制及防治的研究进展[J]. 医学综述, 2018, 24(2):341-346.

[4] OLIVEIRA M M, RATTI B A, DAR R G, et al. Dihydrocaffeic acid prevents UVB-induced oxidative stress leading to the inhibition of apoptosis and MMP-1 expression via p38 signaling pathway[J]. Oxid Med Cell Longev, 2019, 2019:2419096.

[5]龚婕, 马良娟. 皮肤光老化和抗氧化剂研究进展[J]. 中国麻风皮肤病杂志, 2019, 35(11):692-695.

[6]王秀芬. 广藿香酮,亚硫酸氢钠cxl内酯抗小鼠皮肤光老化作用[D]. 广州中医药大学, 2016.