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样品收集、处理及保存方法:
1、 血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2、 血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、 细胞上清液---1000×g离心10分钟除颗粒和聚合物。
4、 组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液
5、 保存------如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70 ℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
产品名称 | GHRP-Ghrelin检测试剂盒 |
英文名称 | Rat growth hormone releasing peptide-Ghrelin, GHRP-Ghrelin Elisa Kit |
货号 | XG00R2346 |
测定步骤:
1.加样
1. 除包被外都需45度加样
2.加样体积要准确
3.管底加样,不能加在管壁上
4.加样时不能产生气泡
2.温浴
1.加标本后和加结合物后,应立即放入按规定的反应温 度的水浴箱。
2.各ELISA板不应叠在一起。
3.为避免蒸发,板上应加盖,或将板平放在底部垫有湿 纱布的金属湿盒中。
4.加入底物后,反应的时间和温度通常不做严格要求。 如室温高于20℃,ELISA板可避光放在实验台上,以便 不时观察,待对照管显色适当时,即可终止酶反应。
3.洗涤
1.洗涤在ELISA过程中不是反应步骤,但却 是决定实验成败的关键。
2.目的是洗去反应液中没有与固相抗原或 抗体结合的物质以及在反应过程中非特 异性吸附于固相载体的干扰物质。
4.读板
1.阴性对照颜色极浅,在定性测定中一般 可采用目视比色。
2.如用酶标仪测定结果,准确性决定于 ELISA板底的平整与透明度、酶标仪的质 量和软件的算法。
实验原理:
是采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并*洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
标本要求:
1. 血清::温血液自然凝固10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
2. 血浆:根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
3. 尿液:无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。
5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),或组织蛋白萃取试剂,用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
ELISA方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定。但ELISA测定中影响因素较多,而且其操作中有一定的技术要求,在检测过程中除正常反应外,有时常见到一些错误的结果。引起ELISA测定错误结果的原因主要有:
①标本因素;
②试剂因素;
③操作因素。
下面就一些常见ELISA操作过程中的问题一一分析。
1.样品稀释 酶联免疫反应是一种敏感性很高的反应,如果血清不稀释,不可避免会产生很强的非特异性反应,出现假阳性。因此,国外检测血清抗体的试剂盒,均规定将血清稀释至适当的倍数,以降低非特异性反应,使特异性的抗原抗体反应充分体现出来。一般产品的样品稀释倍数均通过大量试验确定,以保证试验的灵敏度和特异性。但是,有些用户未能严格按使用说明书操作,如某些产品应取10μl样品进行稀释,个别用户取5μl甚至1μl样品进行稀释,由于吸嘴上不可避免地沾有样品以及微量移液器的精度不够,因此造成样品稀释倍数不准确,检测结果出现问题。
2.试剂盒平衡 试剂盒中所有试剂和板条均应在试验前平衡至室温(约25℃),一般需在室温放置20~30分钟以上。平衡时间太短会造成试剂混匀不够,样品孵育时间相对缩短,ELISA反应不够充分。冬季室温低,可将试剂盒置37℃温箱20分钟。
3.样品和试剂的混匀 稀释前、后的样品必须充分混匀,所有试剂在加样前也须摇匀,以保证试验的均一性。
下列是公司是正在的产品:
2,4-滴异辛酯分析标准品Anti-AS160(phosphoT642)antibody[EPR2733(2)]
二二醇二醚forHPLC,≥99%Anti-ACAT2/Acetyl-CoAacetyltransferaseantibody[EPR8417]
重氮酯91%,≤10%dichloromethaneAnti-ACAT2/Acetyl-CoAacetyltransferaseantibody[EPR8417]
4-羟基-环己烷酯98%Anti-ACAT2/Acetyl-CoAacetyltransferaseantibody[EPR8417]
3-酰基-2-烯酯97%Anti-Podoplanin/gp36antibody[EPR7073]
毒扁豆碱≥98.0%Anti-Podoplanin/gp36antibody[EPR7073]
毒扁豆碱分析标准品Anti-Podoplanin/gp36antibody[EPR7073]
2-基-1,3-己二醇分析标准品Anti-TUGantibody[EPR8616]
1,2-环氧十二烷95%Anti-TUGantibody[EPR8616]
基苯99.8%,无水级Anti-TUGantibody[EPR8616]
铬蓝BIndicatorAnti-CPSF30/NARantibody[EPR7433]
反式-4-氧基肉桂异辛酯98%Anti-CPSF30/NARantibody[EPR7433]
考宁95%Anti-CPSF30/NARantibody[EPR7433]
β-丹分析标准品Anti-PDRG1antibody[EPR6062(2)]
EPA酚类混合物phenlMix809个品种2000ng/μl异醇溶液Anti-PDRG1antibody[EPR6062(2)]
GHRP-Ghrelin检测试剂盒 CD40配体(CD40L)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)Anti-CD163L1antibody[EPR6539]
CD40配体(CD40L)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)Anti-FOXO4/AFXantibody[EPR2150(3)]
CD40配体(CD40L)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)Anti-FOXO4/AFXantibody[EPR2150(3)]
CD40配体(CD40L)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)Anti-FOXO4/AFXantibody[EPR2150(3)]
CD40配体(CD40L)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)Anti-TRAF2antibody[EPR6048]
CD3d分子(CD3d)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)Anti-TRAF2antibody[EPR6048]
CD3d分子(CD3d)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)Anti-TRAF2antibody[EPR6048]
CD3d分子(CD3d)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)Anti-UBE4Bantibody[EPR7471]
CD34分子(CD34)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)Anti-UBE4Bantibody[EPR7471]
CD34分子(CD34)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)Anti-UBE4Bantibody[EPR7471]
CD320分子(CD320)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)Anti-CPSF2/CPSF100antibody[EPR7599]
CD320分子(CD320)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)Anti-CPSF2/CPSF100antibody[EPR7599]
CD320分子(CD320)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)Anti-CPSF2/CPSF100antibody[EPR7599]
CD30配体(CD30L)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)Anti-Smad1antibody[EPR5522]
CD30配体(CD30L)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)Anti-Smad1antibody[EPR5522]