人肾系膜组织提取物【Human Kidney : Normal Glomerular Mesangial Derivatives】
人肾系膜组织主要功能有：(1)组成过滤屏障内壁的重要部分。(2)在炎症和致血栓物质的刺激合成必要的生物活性分子。(3)受损后影响系膜细胞和上皮细胞，进而影响肾脏病变。公司科技提供来自新鲜或冷冻人肾系膜组织中高质量的总RNA，PCR准备的一条cDNA链，蛋白质及其亚组分。这些临床定义的正常人体组织标本采集自各地方医院，采集工作根据IRB和HIPAA批准的方案进行。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。
总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。公司提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。

cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA一链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。

蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人肾系膜组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。

潜在的应用： <1>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA选择性剪接；<3>基因克隆与目标测序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白检测与蛋白质组学；<6>芯片研究与表达图谱。

冷冻保存细胞之方法？
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

细胞培养步骤：

一．培养基及培养冻存条件准备：
1） 准备DMEM-H培养基(GIBCO,货号1199500bt，添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；胎牛血清，10%。也可根据实验需要选择悬浮培养基，使293T细胞悬浮生长。
2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3） 冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二． 细胞处理：
1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。

收到细胞如何处理？

1、首先，观察细胞培养瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有，请拍照，（所拍照片将作为后续服务依据）。
2、用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落；先不要打开培养瓶盖，将细胞置于细胞培养箱内静置培养2-4小时，以便稳定细胞状态。
3、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如贴壁特性（贴壁/悬浮）、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。
4、静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照，记录细胞状态（所拍照片将作为后续服务依据）；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。
5、贴壁细胞：若细胞生长密度超过80%，可正常传代；若未超过80%，移除细胞培养瓶内培养基，预留5ml左右继续培养，直至细胞密度达80%左右再进行传代操作，瓶盖可稍微拧松。
6、悬浮细胞：将细胞培养瓶内液体全部转移至50ml无菌离心管内，1200rpm离心5min，离心后上清培养基可收集备用，管底细胞沉淀加入5ml培养基吹打、重悬。镜检时，若细胞密度超过80%，可将细胞悬液分至2个细胞培养瓶内培养，补加培养基至5ml；若细胞密度未超过80%，将细胞悬液移至原瓶继续培养，直至细胞密度达80%左右时再进行传代操作。
公司产品采用干冰运输，经过逐步的降温，冷藏在-196℃度的液氮罐中，暂时停止其生命活动，保存其活性，使您的实验更生动,公司代理品牌有：ATCC、sciencell、ICLC、GIBCO、IST-Banca等品牌.

Poly(ethylene glycol) diacrylate2，2’，3，3’，4，4’，5，6，6’-九氯联苯(PCB 207)anti- MAD2L1BP antibody肝肾骨性酸酶(ALPL)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

POLY(ETHYLENE GLYCOL) METHYL ETHER METHACRYLATE2，2’，3，4，4’，5，6，6’-八氯联苯(PCB 204) 标准品anti- MAD2L2 antibodyβ-位淀粉样前体蛋白裂解酶2(βACE2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Poly(ethylene glycol) dimethacrylate2，2’，3，3’，4，5’，6，6’-八氯联苯(PCB 201) 标准anti- MADCAM1 antibodyβ-位淀粉样前体蛋白裂解酶2(βACE2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

POLY(ETHYLENE GLYCOL) DIMETHYL ETHER ＆2，2’，3，3’，4，5’，6，6’-八氯联苯(PCB 201) 标准anti- MAEA antibody纤溶酶原(Plg)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

POLYVINYL SULFATE POTASSIUM*PRACTICAL GRADE2，2’，3，3’，4，5’，6，6’-八氯联苯(PCB 201) 标准anti- MAF antibody白介素6受体(IL6R)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Polyethylenimine2，2’，3，3’，4，5，6，6’-八氯联苯(PCB 199) 标准品anti- MAFB antibody状旁腺激素(PTH)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

SECOISOLARICIRESINOLPCB 198(2，2’，3，3’，4，5，5’，6-八氯联苯) 标准品anti- MAFF antibody多功能蛋白聚糖(VS)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

FurilPCB 198(2，2’，3，3’，4，5，5’，6-八氯联苯) 标准品anti- MAG antibody血管内皮生长因子受体1(VEGFR1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

人肾系膜组织提取物Cytospora sp.状腺激素转运蛋白/单羧酸转运蛋白7/8抗体Human UBE2A(Ubiquitin-conjugating enzyme E2 A) ELISA Kit葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Homo sapiens, human自噬微管相关蛋白轻链β3抗体Human PHD2(Prolyl hydroxylase domain-containing protein 2) ELISA Kit70kDa热休克蛋白1A(HSPA1A)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Chaetomium barilochense Calviello, teleomor ..梅克尔-格鲁伯综合征相关蛋白抗体Human MUSK(Muscle, skeletal receptor tyrosine-protein kinase) ELISA Kit烟型胆受体α7(CHRNα7)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..单酶微管相关蛋白MICAL抗体Human PHF20(PHD finger protein 20) ELISA Kit促状腺素受体(TSHR)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Rhizopus oryzae Went et Prinsen Geerligs, t ..基质金属蛋白酶18/19抗体Human AMACR(Alpha-methylacyl-CoA racemase) ELISA Kit烟型胆受体α3(CHRNα3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Phellinus chrysoloma (Fries) Donk, teleomor ..肌管素相关蛋白2抗体Human LRP8(Low-density lipoprotein receptor-related protein 8) ELISA Kit腭/肺/鼻上皮癌关联蛋白(PLUNC)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Dictyostelium magnum Hagiwara单氨酶A+B抗体Human PI3K p110 beta(PtdIns-3-kinase subunit p110-beta) ELISA KitGLI家族锌指蛋白1(GLI1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Corynebacterium glutamicum (Kinoshita et al ..增殖相关蛋白MAGOH抗体Human IFITM3(Interferon-induced transmembrane protein 3) ELISA Kit非转移细胞1表达NM23A蛋白(NME1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)