收到细胞如何处理？

1、首先，观察细胞培养瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有，请拍照，（所拍照片将作为后续服务依据）。
2、用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落；先不要打开培养瓶盖，将细胞置于细胞培养箱内静置培养2-4小时，以便稳定细胞状态。
3、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如贴壁特性（贴壁/悬浮）、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。
4、静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照，记录细胞状态（所拍照片将作为后续服务依据）；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。
5、贴壁细胞：若细胞生长密度超过80%，可正常传代；若未超过80%，移除细胞培养瓶内培养基，预留5ml左右继续培养，直至细胞密度达80%左右再进行传代操作，瓶盖可稍微拧松。
6、悬浮细胞：将细胞培养瓶内液体全部转移至50ml无菌离心管内，1200rpm离心5min，离心后上清培养基可收集备用，管底细胞沉淀加入5ml培养基吹打、重悬。镜检时，若细胞密度超过80%，可将细胞悬液分至2个细胞培养瓶内培养，补加培养基至5ml；若细胞密度未超过80%，将细胞悬液移至原瓶继续培养，直至细胞密度达80%左右时再进行传代操作。

人脐动脉组织提取物【Aortic: Normal Human Aortic Derivatives】
在哺乳动物胚胎发育过程中，从胎儿心脏发出，将胎儿体内代谢废物和代谢产生的二氧化碳运送至胎盘，转移至母体的动脉，其内为静脉血。公司科技提供来自新鲜或冷冻人脐动脉组织中高质量的总RNA，PCR准备的一条cDNA链，蛋白质及其亚组分。这些临床定义的正常人体组织标本采集自各地方医院，采集工作根据IRB和HIPAA批准的方案进行。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。
总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。公司提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。

cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA一链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。

蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人脐动脉组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。

潜在的应用： <1>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA选择性剪接；<3>基因克隆与目标测序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白检测与蛋白质组学；<6>芯片研究与表达图谱。

细胞培养步骤：

一．培养基及培养冻存条件准备：
1） 准备DMEM-H培养基(GIBCO,货号1199500bt，添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；胎牛血清，10%。也可根据实验需要选择悬浮培养基，使293T细胞悬浮生长。
2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3） 冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二． 细胞处理：
1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。
冷冻保存细胞之方法？
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

Barium chloride dihydrate载脂蛋白M抗体anti- MAP9 antibody核因子κB(NFκB)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Platinum tetrachloride载脂蛋白O抗体anti- MAPK10 antibodyⅠ类主要组织相容性复合体G(MHCG)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

THULIUM CHLORIDEβ淀粉样蛋白前体蛋白结合蛋白1抗体anti- MAPK11 antibody肌钙蛋白T(TNT)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

VANADIUM(III) CHLORIDE共济失调性眼球运动功能丧失相关蛋白AOA1抗体anti- mapk11 antibody二胺酶(DAO)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

GADOLINIUM(III) CHLORIDE HEXAHYDRATE腺嘌呤酸核糖转移酶抗体anti- MAPK12 antibody高铁血红蛋白还原酶(MHBR)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Zirconium tetrachloride酸化水通道蛋白2抗体anti- MAPK13 antibody高铁血红蛋白还原酶(MHBR)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

GALLIUM(III) CHLORIDEADP核糖基化因子1抗体anti- MAPK4 antibody环加氧酶2(PTGS2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Rhodium (III) chloride trihydrateADP核糖基化因子5抗体anti- MAPK4 antibody丝裂原激活蛋白激酶10(MAPK10)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

人脐动脉组织提取物Trichophyton erinacei (Smith et Marples) Pa ..微管相关蛋白1B抗体Human CYP27B1(25-hydroxyvitamin D-1 alpha hydroxylase, mitochondrial) ELISA KitG蛋白偶联受体120(GPR120)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

dried环指蛋白60抗体Human RAB27B(Ras-related protein Rab-27B) ELISA Kit胆囊收缩素(CCK)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Homo sapiens, human错配修复蛋白3抗体Human CDH11(Cadherin-11) ELISA Kit激活素A受体ⅡA(ACVR2A)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Dioszegia changbaiensis F.Y. Bai et Q.M. Wa ..E3连接酶MMS21蛋白抗体Human MUC4(Mucin-4) ELISA Kit胆绿素还原酶A(BLVRA)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

freeze-dried黑素皮质素2受体辅助蛋白2抗体Human IL15RA(Interleukin-15 receptor subunit alpha) ELISA Kit成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Stachybotrys chartarum (Ehrenberg) Hughes神经元膜糖蛋白锚定蛋白2抗体Human GHR(Growth hormone receptor) ELISA Kit黑色素瘤优先表达抗原(PRAME)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Saccharomyces bayanus Saccardo, teleomorph酸化丝裂原活化蛋白激酶酸酶1抗体Human PCK2(Phosphoenolpyruvate carboxykinase [GTP], mitochondrial) ELISA Kit多聚ADP核糖聚合酶(PARP)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

frozen肌球蛋白结合蛋白C抗体Human WNT5A(Protein Wnt-5a) ELISA KitFK506结合蛋白12雷帕霉素关联蛋白(FRAP)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

公司产品采用干冰运输，经过逐步的降温，冷藏在-196℃度的液氮罐中，暂时停止其生命活动，保存其活性，使您的实验更生动,公司代理品牌有：ATCC、sciencell、ICLC、GIBCO、IST-Banca等品牌.

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