一、细胞基本属性

细胞别称：LOVO ；人结肠癌细胞系

种属来源：人

年龄性别：男；56岁

组织来源：直结肠腺癌，转移位置：左锁骨上区

生长特性：贴壁生长

细胞形态：上皮细胞样

背景简介：LoVo细胞是于1971年从诊断为结肠腺癌的56岁男性白人的一个转移到左锁骨上区的肿瘤结节建系而来。癌基因检测表明，LoVo细胞C-myc、K-ras、H-ras、N-ras、Myb、sis和fos的表达呈阳性；癌基因N-myc的表达未做检测。LoVo细胞在裸鼠中能成瘤，与107细胞联合皮下接种5只裸鼠21天后全部成瘤。LoVo表达肿瘤特异的核基质蛋白蛋白CC-3和CC-4。

生物安全等级：1

细胞规格：1×106cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装

支原体检测：无

基因表达情况：carcinoembryonic antigen (CEA) 908 ng/10^6 cells/10 days. The cells are negative for expression of CSAp (CSAp-) and colon antigen 3.

保藏机构：ATCC; CCL-229 BCRC; 60148 BCRJ; 0332 CCLV; CCLV-RIE 1151 DSMZ; ACC-350 ECACC; 87060101；中国医学基础医学研究所细胞资源中心

培养基：Ham’s F-12K+10% FBS+PS

培养条件：气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃

冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

倍增时间：~34-52 hours

STR鉴定位点Amelogenin：X，Y；CSF1PO：10，11，13，14；D13S317：8，11；D16S539：9，12；D18S51：13，18；D19S433：14，15；D21S11：29，31.2；D2S1338：17，18；D3S1358：14，OL；D5S818：11，13；D7S820：10，11；D8S1179：10；FGA：18，20；TH01：9.3；TPOX：8，9；vWA：17，18；

二、细胞培养操作

1) 复苏细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL培养基，培养过夜）。第三天换液并检查细胞密度。

2) 细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

a、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；

b、添加0.25%消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；

c、弃上清，沉淀细胞用12ml培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代，最后放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；

d、待细胞贴壁后，观察培养结果，之后进行换液培养或传代。

3) 细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例；

a、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；

b、添加0.25%消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；

c、用适量的冻存液（FBS：DMSO=9 ：1）重悬细胞，并放置于冻存管中；

d、先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。

三、培养注意事项

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象 发生请及时和我们联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需 细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由 客户自行承担。

3. 用 75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度 变化及剧烈碰破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将 T25 瓶置于 37℃培养箱放置 2-4h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm 离心 3 min，弃上 清。加 5 mL PBS 重悬细胞，再 900 rpm-1000 rpm 离心 3 min，用新鲜的培养基重悬 细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通 交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞 的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基 (灌液培养基) 不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培 养条件新配制的培养基来培养细胞。  收到细胞后次传代建议 1：2 传代 。

9. 注意：  1:2 传代就是 1 个 T25 瓶传 2 个 T25 瓶或者 2 个 6cm 皿。不是 1 个 T25 瓶传 2 个10cm 皿。

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