名称 M14细胞(人黑色素瘤细胞)
别称 M14-MEL; UCLA-SO-M14; UCLA SO M14; UCLA-SO-14; Melanoma 14; M-14
种属 人
年龄（性别） 33岁
生长特性 贴壁细胞
细胞形态 上皮细胞样
生长培养基 DMEM(PM150210)＋10% FBS(164210-500)＋1% P/S(PB180120)
推荐传代比例 1:3-1:4
M14细胞(人黑色素瘤细胞)推荐换液频率 2~3次/周
倍增时间 ~26.3 hours
冻存条件 冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO温度：液氮
培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%温度：37℃

细胞冻存操作要点：

1、细胞冻存前12~24h，换新鲜培养基，使细胞一直处于对数生长期。

2、待细胞长至80%汇合时*消化，用新鲜培养基吹打后制成细胞悬液，1000rpm离心10min。悬浮细胞则直接离心。

3、弃上清，加入冻存液重悬细胞沉淀，调整细胞浓度为3×106~1×107cells/mL。将细胞悬液分至冻存管内，每管1~1.5mL，拧紧盖子。在管壁上做好标记，标明细胞名称、冻存日期等。

4、按下列顺序依次降温：室温→4℃ 20min→-20℃ 30min→-80℃过夜→液氮保存。也可使用程序降温盒更为方便，细胞冻存管放入程序降温盒内可直接放入-80℃过夜，再转至液氮罐内。注意程序降温盒内异丙醇的量必须高于zui低刻度线；冻存5次后异丙醇需要跟换一次，以免影响冻存效果。

5、细胞冻存后应取出一管复苏，检测细胞的存活率。理论上细胞可在液氮内长期保存，为稳妥起见可在细胞冻存半年后复苏培养，观察细胞生长情况，再继续冻存。

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