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STORM(Stochastic Optical Reconstruction Microscopy)随机光学重构显微镜是单荧光分子照相技术的延伸成果。受光的衍射局限,非常邻近的荧光分子的发光通过物镜后,焦平面上的光点是大部分重叠的,如果我们可以使这样的分子不同时发光,并且先后拍摄它们的独立发光图像,我们就可以将这些发光点的中心点逐一描绘出来,重构出一幅完整的、高分辨率的图像。
Ø STORM超高分辨率显微镜是美国哈佛大学华人科学家庄晓威发明的超高分辨率显微成像技术,尼康公司独立引进这一技术,在市场上正式推广“N-STORM”。
Ø N-STORM的核心优势在于“Alexa647”这种高量子产率的染料分子的应用:N-STORM可以用Alexa405-Alexa647、Cy2-Alexa647、Cy3-Alexa647三种配对染料标记靶分子,通过配对的激光交替照射,Alexa647荧光分子可以在暗态与亮态之间反复切换,从而取得单分子照相的条件。N-STORM对1000帧以上的单分图像进行重构,获得超高分辨率荧光图像。
超高分辨率显微镜
Ø 此外,N-STORM通过在光路中引入圆柱镜片,实现了Z轴上的超高分辨率的成像。
Ø N-STORM横向分辨率20nm,纵向分辨率50nm。