成都小鼠可替宁（Cotinine）酶联免疫试剂盒

使用说明书

l 本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中小鼠可替宁（Cotinine）的含量。

l 有效期：6个月

l 保存条件：2-8℃

l 本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断

样本处理及要求

1.  血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2.  血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000g离心20分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

3.  组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将*碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。*在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。last将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。

4.  细胞培养物上清或其它生物标本：1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
注：标本溶血会影响last检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

标本处理

1.  本公司只对试剂盒本身负责，不对因使用该试剂盒所造成的样本消耗负责，请使用者使用前充分考虑到样本的可能使用量，预留充足的样本。

2.  实验前应预测标本含量，如果标本浓度过高，应对标本进行稀释，使稀释后的标本符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。标本使用0.01mol/L的PBS稀释(PH=7.0-7.2)。

3.  若所检样本不包含在说明书所列样本之中，建议进行预实验验证其有效性，并注意留存样本。

4.  使用化学裂解液制备的组织匀浆或细胞提取液可能会由于某些化学物质的引入导致ELISA实验结果偏差。

5.  若样本为细胞培养上清，因该类样本干扰因素较多，如：细胞状态、细胞数量、采样时间等，所以可能存在检测不出的情况。

6.  某些天然蛋白或重组蛋白，包括原核及真核重组蛋白，可能因为与本产品所使用的检测抗体及捕获抗体不匹配，而不被检测出。

7.  建议使用新鲜样本，保存时间过长可能会存在蛋白降解或变性导致实验结果偏差。

成都小鼠可替宁（Cotinine）酶联免疫试剂盒需要而未提供的试剂和器材

• 酶标仪（450nm）

• 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

• 37℃恒温箱

• 蒸馏水或去离子水

试剂盒组成

注意事项

• 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。

• 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。

• 消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。

• 底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。

• 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

• 在储存和温育时避免强光直接照射。

• 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

• 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。

• 不能使用过期产品。

• 如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。

操作步骤

1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.  设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.  样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.  除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.  弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

实验结果计算

以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。

试剂盒性能

特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

重复性：板内变异系数小于10% ，板间变异系数小于15% 。

特点：

1、灵敏度：有二层含义，1)为试剂检出被检物质的min量的能力；2)为试剂对大量样品中阳性检出的能力;

2、特异性：常用交叉反应率表示。含有与待测物相近结构部份的物质可能存在交叉反应，使测定结果升高，可能导致假阳性，所以交叉反应是评价其质量的关键指标;

3、精密度：ELISA试剂一般指其批内CV%，其值应小于15%；定量试剂应同时考察线性范围;

4、准确度：通过添加回收实验进行评价;

5、简便性：指在不影响试剂的前三项指标的前题下，实验和测定步骤越少越好，在定性实验中结果判断简单明了，定量试验结果计算也应简单;

6、安全性：指试剂对操作者和环境安全无害无传染性;

7、经济性：试剂在同等质量条件下通过大规模生产或技术进步降低成本，而市场价格比较合理;

8、试剂评价：需要有的确证方法和确证的样品进行检测。

Elisa试剂盒自备物品

1.   酶标仪(建议参考仪器使用说明提前预热)

2.   微量加液器及吸头，EP管

3.   蒸馏水或去离子水，全新滤纸。

订购说明：

1、绝大部分产品备有现货，一般情况下都能订货当日发货。

2、部分非常用产品，需提前1－2日预订，海外期货则需要提前3-6周预订。

3、部分产品价格会因货期、批次等因素发生变化，若有变动以订货当日new价格为准。

4、每日订单截止时间为16点整，部分城市可到17点整，因超过截止时间造成当日不能发货的将于次日安排发货。

5、请办理完货款后，将底单等连同收货人的地址、姓名、电话等以传真、短信、电话等形式通知我们。

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