小鼠Toll样受体9(TLR9)ELISA试剂盒检测原理

将目标抗体包被于96孔微孔板中，制成固相载体，向微孔中分别加入标准品或标本，其中的目标连接于固相载体上的抗体结合，然后加入辣根过氧化物酶标记的抗体，将未结合的抗体洗净后再次*洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的目标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（O.D.值），计算样品浓度。

▎  重复性

板内，板间变异系数均<10%。

▎  批内差

取同批次试剂盒对低、中、高值定值样本进行定量检测，每份样本连续测定20次，分别计算不同浓度样本的平均值及SD值。

▎  批间差

选取3个不同批次的试剂盒分别对低、中、高值定值样本定量测定，每个样本使用同一试剂盒重复测定8次，分别计算不同浓度样本的平均值及SD值

精密度

精密度用样品测定值的变异系数CV表示。CV（%）=SD/mean×100  CV<10% Inter-批间差: CV<13%

稳定性

经测定，试剂盒在有效期内按推荐温度保存，其活性降低率小于5%。
为减小外部因素对试剂盒破坏前后检测值的影响，实验室的环境条件需尽量保持一致，尤其是实验室内温度、湿度及温育条件。其次由同一实验员来进行操作可减少人为误差。

为了帮助您更好地解决在实验中可能碰到的各种问题，我们设计了这些问题指导，配以试剂盒内的说明书一起供您参考使用。很多因素都将导致免疫测定实验的失败，而大多数技术失误是可以通过全面阅读和准确理解说明书以及实验步骤来避免的。若对试剂盒内的说明书有任何意见和建议，欢迎反馈。我们期待听到您的声音，从而完善我们的产品，更好地为您服务。
◆ 仔细阅读说明书
◆ 检查试剂盒标签上的有效期。如果超过有效期，请勿使用。
◆ 按说明书确定所有试剂齐全（数量、体积）
◆ 标本制备要规范，每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备（贮存），尽量分装做备份。
短期内无法实验者，注意低温保存
◆ 准备好所有实验额外所需物品， （比如移液器，试管，清洗器， 酶标仪）
◆ 按说明书将所用试剂平衡至室温，根据检测标本数量确定所需试剂的量
◆ 检查试剂盒内每种试剂的贮存条件，保证所有试剂均按照试剂盒内说明书推荐的条件存储。
◆ 检查不稳定或者变质的试剂溶液（比如沉淀或变色）。有些试剂，比如标准品稀释液或者检测稀释液，可能在设计时就含有沉淀物。所有试剂在滴入酶标板之前，必需充分混匀。而由于沉淀物的特性，在加入酶标板之前，必需不停搅拌。
◆ 保证充分的孵育时间和温度。
◆ 切勿使用不同生产批号的试剂取代现有试剂或混合现有试剂。
◆ 在混合或溶解蛋白溶液时，避免泡沫产生。
◆ 在实验开始之前，安排好实验流程。
◆ 在实验开始之前，清洁工作台。
◆ 若有问题，应与我公司或代理商进行沟通。