产品名称：胚肾细胞
英文简称：AAV-293细胞

货号：LZ-X969428
规格：T25
生长特性：贴壁

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冻存培养基：
冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有 DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的*冻存培养基。
1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型*冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优化，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。 
2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。
培养细胞冻存方案：
以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。 
1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。
2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需*培养基重新悬浮细胞。
3.采用、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。
4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。
注：离心速度和时间取决于细胞种类。
5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。
6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。
7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低  1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。

实验材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml灭菌烧杯2个；
3、50ml离心筒2个 
4、灭菌培养皿1个，细胞培养瓶1个 
5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个 
6、细胞计数板1块； 
7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把； 
8、酒精灯1台；

实验报告：
一、分离与培养：
   1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
   2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
   3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；
   4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
   5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
   1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
   2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
   4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
   5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
   6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微
镜下观察图像并拍照。

注意事项：
     尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
     如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
     染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
     如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
     荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
     用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
     需自备PBS。
     本产品于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
     为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
开菲尔乳杆菌异鼠李素;Isorhamnetin尿素琼脂斜面pH7.2抗Ⅲ型胶原抗体

大肠埃希氏菌(大肠杆菌)羽扇豆;Lupeol赖氨酸脱羧酶试验抗IV型胶原抗体

浑浊红球菌异去甲蟛蜞菊内酯;Demethylwed氨基酸脱羧酶试验对照抗Ⅵ型胶原抗体

香茅假单胞菌23-乙酰泽泻B;AlisolB2无菌液体石蜡抗I型胶原抗体

解肝磷脂土地杆菌盐酸小檗碱;BerberinehydONPG培养基抗Ⅴ型胶原抗体

红平红球菌异补骨脂素;Isopsoralen缓冲葡萄糖蛋白胨水抗Ⅹ型胶原抗体

土生拉乌尔菌（土生克雷伯菌）原花青素;ProcyanidinV-P试剂前列腺素氧化环化酶1抗体

解藻弧菌（溶藻弧菌）原儿茶;Protocatechuald蛋白胨水前列腺素氧化环化酶2抗体

洋葱伯克霍尔德氏菌原儿茶酸;3,4-DihydroxybeKovacs氏靛基质试剂C-藻蓝素/藻蓝蛋白抗体

霍乱弧菌柚皮素;Naringenin磷酸盐缓冲液pH7.2C-肽

肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种杨梅素;Myricetin无菌磷酸盐缓冲液pH7.2钙结合蛋白抗体

日勾维肠杆菌异皮啶;Isofraxidin无菌磷酸盐缓冲液pH7.2C-反应蛋白抗体

施氏假单胞菌亚麻酸乙酯;Linolenicacid高盐察氏培养基鼠抗人C-反应蛋白单克隆抗体

恶臭假单胞菌乙酰;Acetylaconitin磷酸盐缓冲液pH7.2环腺苷酸应答元件结合蛋白抗体

表皮葡萄球菌盐酸黄连碱;Coptisinechlo无菌磷酸盐缓冲液pH7.2磷酸化环腺苷酸应答元件结合蛋白抗体
AAV-293细胞兔抗人Kappa链抗血清（k-链抗血清）断血流皂苷A（标准品）Human, Mouse, Rat

兔抗人IgG（γ-链）恒定区抗血清对氧苯Human, Mouse

牛血清白蛋白抗血清对羟苯(标准品)Human

荧光素Cy7标记兔IgG(流式同型对照)对香豆;对羟肉桂(标准品)Human

荧光素Cy7标记小鼠IgG(流式同型对照)对叶百部（标准品）Human, Mouse

荧光素Cy7标记羊IgG(流式同型对照)对叶百部三盐Human, Mouse, Rat

荧光素Cy7标记大鼠IgG(流式同型对照)盾叶薯蓣（标准品）Human, Mouse

Alexa Fluor 555标记兔IgG(流式同型对照)盾叶新苷Human, Mouse, Rat

荧光素PE标记兔抗FITC多被银莲花皂苷R8（标准品）Escherichia coli