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Amplite 荧光法通用型蛋白酶活性检测试剂盒 蛋白酶测定法广泛用于蛋白酶抑制剂的研究和蛋白酶活性的检测。监测各种蛋白酶活性已成为许多生物实验室的常规任务。 一些蛋白酶已被确定为良好的药物开发目标。
我们的Amplite 通用荧光蛋白酶活性检测试剂盒是进行常规检测分离蛋白酶或鉴定蛋白质样品中污染蛋白酶的理想选择。该试剂盒使用荧光酪蛋白偶联物，其被证明是广谱蛋白酶（例如*，*，嗜热菌蛋白酶，蛋白酶K，蛋白酶XIV和弹性蛋白酶）的通用底物。在完整的底物中，酪蛋白用绿色荧光染料严重标记，导致显着的荧光猝灭。蛋白酶催化的水解减轻了其猝灭效应，产生明亮的荧光染料标记的短肽。荧光强度的增加与蛋白酶活性成正比。 该测定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，并且易于适应自动化。使用FITC滤光片组，可以使用荧光酶标仪在Ex / Em = 490/525 nm下轻松读取其信号。百萤生物为您提供 优质的Amplite 荧光法通用型蛋白酶活性检测试剂盒。
一个96孔板的测定方案
以下说明书仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。
概述（方案A）
检测样品中的蛋白酶活性
准备蛋白酶底物溶液 (50 µL)
添加底物对照、阳性对照或测试样品 (50 µL)
跳过孵育以进行动力学读数或孵育 30 至 60 分钟以进行终点读数
在 Ex/Em = 490/525 nm 处检测荧光强度
概述（方案B）
使用纯化酶筛选蛋白酶抑制剂
准备蛋白酶底物溶液 (10 µL)
添加底物对照、阳性对照、载体对照或测试样品 (90 µL)
跳过孵育以进行动力学读数或孵育 30 至 60 分钟以进行终点读数
在 Ex/Em = 490/525 nm 处检测荧光强度
工作溶液配制
在 2X 检测缓冲液（组分 C）中以 1:100 的比例稀释蛋白酶底物（组分 A）。在 96 孔板中，每次测定使用 50 μL 的蛋白酶底物溶液。
注意：2X 检测缓冲液（组分 C）设计用于检测糜*白酶、胰*白酶、嗜热菌蛋白酶、蛋白酶 K、蛋白酶 XIV 和人类白细胞弹性蛋白酶的活性。对于其他蛋白酶，请参阅下表 1 以了解适当的测定缓冲液配方。
在去离子水中以 1:50 的比例稀释胰*白酶（5 U/µL，组分 B），以获得 0.1 U/µL 的浓度。
将 5 mL 去离子水加入 5 mL 的 2X 检测缓冲液（组分 C）中。
在 1X 检测缓冲液中以 1:20 稀释蛋白酶底物（组分 A）。对 96 孔板使用 10 μL/孔的蛋白酶底物溶液。
注意：2X 测定缓冲液（组分 C）设计用于检测糜*白酶、胰*白酶、嗜热菌蛋白酶、蛋白酶 K、蛋白酶 XIV 和人类白细胞弹性蛋白酶的活性。对于其他蛋白酶，请参阅下表 1 以了解适当的测定缓冲液配方。
将 1X 检测缓冲液中的蛋白酶稀释至 500-1000 nM 的浓度（对于胰*白酶 50-100 U/mL）。每孔需要 10 μL 的蛋白酶稀释液。为所有测试样品准备适当的量，为阳性对照和载体对照孔准备额外的量。
