样品实验方案

溶液配制

工作溶液配制

1.准备StrandBrite 工作溶液：

1.1  准备的水溶液工作溶液StrandBrite 绿色通过在TE浓缩DMSO溶液的200倍稀释液（在DEPC的10mM的Tris-HCl，1mM的EDTA，pH 7.5中经处理的水）。例如，添加50μL StrandBrite 绿色 至10mL TE缓冲液，以制备足够的工作溶液在200至100个测定样品 μ L终体积。通过用箔纸覆盖或将其置于黑暗中来保护工作溶液免受光照。

注意1：我们建议在塑料容器中而不是玻璃中制备此溶液，因为染料可能会吸附到玻璃表面。

注意2：为获得佳结果，应在准备后的几个小时内使用此溶液。

标准液配制：

1.准备RNA标准液的系列稀释液（0到1µg / mL ）：

1.1准备一个100 μ 克/ mL储备在RNA的溶液DEPC处理过的水。

1.2添加10μL 100 μ 克/毫升RNA储备溶液（来自步骤2.1） ，以490 μ 大号测定缓冲液（成分B）为具有2 微克/ mL的RNA溶液，然后执行1：2系列稀释来获得1000， 500、250、125、62.5、31.3、15.6和0 ng / mL。

1.3如表1和表2所述，将RNA标准品和含RNA 的测试样品添加到96孔黑色固体微孔板中。

表1黑色固体96孔微孔板中RNA标准品和测试样品的布局

注：RS = RNA 标准；BL =空白控制；TS =测试样品

表2每个孔的试剂组成

注：将从15.6到1000 ng / mL的RNA标准品的系列稀释液一式两份地添加到DS1到DS7的孔中。

运行RNA assay分析：

1.将100μLStrandBrite Green工作溶液（来自步骤2）添加到RNA标准品，空白对照和测试样品（参见步骤3）的每个孔中，以使总RNA测定体积为200μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔添加25μL样品和25μLStrandBrite Green工作溶液。

2.在避光的条件下，将反应在室温下孵育5至10分钟。

3.用分光荧光计在Ex / Em = 490/525 nm （在515 nm 处截止）监测荧光的增加。

注意：为使光漂白效应小化，请对所有样品保持恒定的荧光测量时间。

4.用空白孔（仅含测定缓冲液）中的荧光作为对照，并从具有RNA标准液或测试样品的比色皿中减去。RNA样品的浓度根据RNA标准曲线测定。