96孔板检测示例

操作步骤

以下方案是使用StrandBrite Green定量RNA的示例。 打开前让所有组件升温至室温。处理所有材料时，务必使用干净的一次性手套 使用无核酸酶水和无菌一次性聚丙烯塑料制品进行试剂制备。

注意：没有数据可用于解决StrandBrite Green RNA染色的致突变性或毒性。 因为这种试剂与核酸结合，所以应将其作为潜在的诱变剂进行处理，并进行适当的处理。 应谨慎处理DMSO储备溶液，因为已知DMSO有助于有机分子进入组织。

1.准备1X测定缓冲液

通过用无菌，蒸馏，无核酸酶的水稀释浓缩的缓冲液20X（组分B）来制备1X测定缓冲液。

2.准备StrandBrite 绿色工作溶液

通过在1X测定缓冲液中将浓缩的DMSO溶液稀释200倍来制备StrandBrite Green工作溶液。例如，将50μLStrandBrite Green（组分A）加入10 mL 1X测定缓冲液中（来自步骤1）。通过用铝箔覆盖或将其置于黑暗中来保护工作溶液免受光照。

注1：我们建议将此溶液用塑料容器而不是玻璃制备，因为染料可能会吸附到玻璃表面。

注2：为获得佳结果，该溶液应在制备后几小时内使用。

3.准备RNA标准品的连续稀释液（0至1μg/ mL）：

3.1将10μL100μg/ mL RNA原液（组分C）加入990μL分析缓冲液（组分B）中，得到1μg/ mL RNA溶液，然后进行1：3连续稀释，得到约1000,300， 100,30,10,3,1和0 ng / mL。

注意：未使用的核糖体RNA标准品（组分C）应在无核酸酶的塑料瓶中分成单次使用的等分试样，并储存在-20℃。

3.2如说明书中表1和2中所述，将RNA标准品和含有测试样品的RNA添加到96孔固体黑色微孔板中。

4.运行RNA测定：

4.1将100μLStrandBrite 绿色工作溶液（来自步骤2）添加到RNA标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（参见步骤3）中，使总RNA测定体积为200μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLStrandBrite 绿色工作溶液。

4.2在室温下孵育反应2至5分钟，避光。

4.3使用荧光分光光度计在Ex / Em = 490 / 545nm（515nm处的截止值）下观察荧光增加。

注意：为尽量减少光漂白，请保持所有样品的荧光测量时间不变。

4.4空白孔中的荧光（仅含测定缓冲液）用作对照，并从具有RNA标准品或测试样品的那些比色皿的值中减去。根据RNA标准曲线确定样品的RNA浓度。