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Amplite 比色法葡萄糖定量试剂盒 葡萄糖是一种单糖,是生物学中最重要的碳水化合物。它是细胞生长的能量和代谢的中间产物。作为光合作用的主要产物之一,葡萄糖在原核生物和真核生物中都开始细胞呼吸。葡萄糖水平是许多代谢性疾病例如糖尿病的关键诊断参数。该试剂盒提供了一种快速,灵敏的葡萄糖测量方法。它使用基于葡萄糖氧化酶的酶偶联反应通过产生过氧化氢来检测葡萄糖,该过氧化氢由我们的Amplite Red过氧化物酶底物进行检测。 Amplite Red过氧化物酶底物可通过酶标仪在约570 nm处读取。该测定可以轻松适用于需要测量葡萄糖的多种应用。该测定法具有非常低的背景,因为它在红色可见光范围内运行,可明显降低来自生物样品的干扰。使用该试剂盒,可以检测低至3 µM D-葡萄糖。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供的Amplite 比色法葡萄糖定量试剂盒。
样品实验方案
简要概述
准备并添加葡萄糖标准品和/或测试样品(50μL)
准备并添加葡萄糖分析工作溶液(50μL)
在37°C孵育10-30分钟
检测OD值=570nm左右的吸光度
溶液配制
1.储备溶液配制
除非另有说明,否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1.1Amplite 红色储备液(250X):
将100μLDMSO(组分E)加入到Amplite Red底物(组分A)的小瓶中。应立即使用原液。任何剩余的溶液应等分并在-20℃重新冷冻。注意:避免反复冻融循环。注意:在硫醇如二硫苏糖醇(DTT)和2-巯基*醇存在下,Amplite Red底物不稳定。反应中DTT或2-巯基*醇的浓度应不高于10μM。 Amplite Red底物在高pH(> 8.5)下也不稳定。因此,反应应在pH 7-8下进行。建议使用提供的分析缓冲液(pH 7.4)。
1.2辣根过氧化物酶(HRP)储备液(10 U / mL):
将1mL测定缓冲液(组分B)加入到辣根过氧化物酶(组分C)的小瓶中。注意:未使用的HRP溶液应分为单次使用的等分试样并储存在-20℃。
1.3葡萄糖氧化酶溶液(100 U / mL):
将1mL测定缓冲液(组分B)加入葡萄糖氧化酶(组分D)的小瓶中。注意:未使用的葡萄糖氧化酶溶液应分为一次性等分试样并储存在-20℃。
1.4葡萄糖原液(800mM):
将1mL测定缓冲液(组分B)加入葡萄糖小瓶(组分F)中。注意:未使用的葡萄糖溶液应分为单次使用的等分试样并储存在-20℃。
2.标准溶液配制
2.1葡萄糖标准溶液配制
通过将适量的800mM葡萄糖储备溶液稀释到测定缓冲液(组分B)中来制备葡萄糖标准品,以产生30μM的葡萄糖浓度。 然后在测定缓冲液(组分B)中进行1:3连续稀释,得到约10,3,1,0.3,0.1和0.03μM连续稀释的葡萄糖标准品。 包括非葡萄糖缓冲液对照作为空白对照。
3.工作溶液配制
表1.一个透明底96孔微孔板的分析工作溶液(2X)
组分 | 容积 |
Amplite 红色储备液(250x) | 20ul |
HRP储备液(10 U / mL) | 100ul |
葡萄糖氧化酶溶液(100 U / mL) | 100ul |
分析缓冲液 | 4.78ml |
总容积 | 5ml |