操作步骤

1.准备HHBS缓冲液，10％Pluronic®F-127溶液和25 mM Probenecid溶液。

2.在高质量无水DMSO中制备2 mM至5 mM BAPTA，AM * CAS 126150-97-8 *储备液。
2.1BAPTA的量，AM * CAS 126150-97-8 *使用量：1毫克
2.2所需浓度：2 mM
2.3在合适的容器中，将1mg BAPTA，AM * CAS 126150-97-8 *与653.87μL无水DMSO混合。

3.在HHBS中制备含有10μMBAPTA，AM * CAS 126150-97-8 * 4,0.08％Pluronic®F-127和2mM丙*舒的2X工作溶液。
3.1终孔内浓度BAPTA，AM * CAS 126150-97-8 *：5μM
3.2Pluronic®F-127的终井内浓度：0.04％
3.3终孔内浓度的丙*舒：1mM
3.4在合适的容器中混合16μLBAPTA，AM * CAS 126150-97-8 *，25.6μL10％Pluronic®F-127和256μL25mM丙*舒。接下来，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为3.2 mL。
注意：对于大多数细胞系，我们建议BAPTA的终浓度，AM * CAS 126150-97-8 *为4至5μM。
注意：推荐的Pluronic F-127井浓度终为0.02％至0.04％。
注意：推荐的终浓度为1至2.5 mM的Probenecid。

4.将100μL染料工作溶液加入已经含有100μL培养基的所需孔中。
4.1该步骤将染料工作溶液从2X稀释至1X，并将每种组分的终浓度调节至以下：5μMBAPTA，AM * CAS 126150-97-8 *，0.04％Pluronic F-127,1mM丙*舒。

5.孵育染料
5.1将染料加载板在细胞培养箱中孵育20-120分钟。
5.2将染料加载板在室温下孵育30分钟。

6.用1.0 mM Probenecid准备HHBS缓冲液（或您选择的缓冲液）。
6.1在合适的容器中加入160μL的25mM丙*舒。接下来，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为4 mL。

7.用HHBS缓冲液或您选择的缓冲液替换染料工作溶液，使用1.0 mM Probenecid。
7.1首先，从所需孔中除去200μL染料工作溶液和培养基。
7.2在相同的孔中加入200μL含有1.0mM丙*舒的HHBS（或您选择的缓冲液）。

8.运行实验
8.1为您的样品添加所需的处理。
8.2以Ex / Em = / nm运行实验。