操作说明

注意：以下是我们推荐的方案。该方案仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

1.将1克Pluronic F-127溶于10毫升蒸馏水中，制成10％（w / v）原液，或2克Pluronic F-127在10毫升无水二甲基亚砜（DMSO）中制成20％（w / v）储备溶液。这些可能需要在40至50℃的温度下加热约30分钟。在室温下储存溶液。

注意：不要冷却或冷冻Pluronic F-127溶液，因为它可能会沉淀。如果观察到沉淀，可以通过加热至37℃使沉淀物溶解并在使用前涡旋。

2.将10％或20％Pluronic®F-127储备液（来自步骤1）稀释到细胞上样缓冲液中，如Hanks和20 mM Hepes缓冲液（HHBS），稀释度为1：1000至1：500，以达到0.02至0.04％的工作溶液。

3.然后将AM酯的DMSO储备溶液稀释到0.02至0.04％的工作溶液（来自步骤2）中，以获得1μM至10μM的最终AM酯浓度。

注意：Pluronic F-127的最终浓度通常保持在0.08％或以下。

4.将细胞在所需温度下孵育10分钟至1小时。

注意：通常，希望使用所需的最少量的AM酯来获得足够的荧光信号噪声水平。

5.标记后，在开始实验之前用HHBS或新鲜培养基洗涤细胞。