样本实验方案

概述

1.准备一氧化氮工作溶液（50 µL）
2.加入一氧化氮标准液或测试样品（50 µL）
3.在室温下孵育30-60分钟
4.监控荧光强度

溶液配制

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 DAW-J2储备溶液（200X）：
将25 mL DMSO加入小瓶DAW-J2（组分A）中，制成200X储备溶液。

1.2 一氧化氮标准溶液（100 mM，未提供）：
我们使用DEA NONOate（Cayman Chemical，货号82100，CAS＃372965-00-9）作为一氧化氮标准。 一氧化氮的标准溶液在0.01N NaOH中的浓度为100 mM。

2.标准溶液

一氧化氮标准
将10 µL 100 mM NONOate标准溶液添加到990 uL分析缓冲液（组分B）中，以生成1 mM一氧化氮标准溶液（SD7）。然后进行1：2系列稀释，以得到系列稀释的一氧化氮标准液（SD6-SD1）。注意：稀释的NONOate标准溶液不稳定，应立即使用。

3.工作溶液

将25 µL DAW-J2 200X储备溶液加入5 mL的测定缓冲液（组分B）中并充分混合。 注意：此一氧化氮工作溶液足以进行100次测定。工作溶液不稳定，请及时使用，并避免直接暴露在光线下。

样品操作及实验分析

表1：黑色96孔微孔板中一氧化氮标准品和测试样品的布局。 SD =标准，BL =空白对照，TS =测试样品

表2：每个孔的试剂组成

1.根据表1和表2提供的布局，将一氧化氮标准液（SD），空白对照（BL）和测试样品（TS）制成黑色96孔微孔板。对于384孔板，请使用25 µL 每孔试剂，而不是每孔50 µL。

2.将50 µL一氧化氮工作溶液添加至标准液，空白对照和测试样品的每个孔中，以使一氧化氮总测定体积为100 µL /孔。 对于384孔板，请在每个孔中使用25 µL工作溶液，总体积为50 µL /孔。

3.避光保存，室温下孵育反应30分钟至1小时。

4.使用荧光酶标仪在激发= 570 nm，发射= 610 nm（截止= 590 nm）下监控荧光的增加。