MycoLight 活细菌荧光成像试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测细菌的试剂盒，该活细菌荧光成像套件提供了一种简便方法，可通过荧光显微镜可视化活细菌。 MycoLight 520是一种非荧光酯酶底物，可扩散到革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌中。 通过细菌细胞内非特异性酯酶水解后，会产生绿色荧光产物，并在细菌内积累。 与常用的酯酶底物CFDA和CFDA-AM相比，该试剂盒可提供更明亮，更稳定的信号，具有更低的背景和更容易的染色方案。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的MycoLight 活细菌荧光成像试剂盒。

样品实验方案

简要概述

1.准备100X染料储备溶液
2.准备细菌样品
3.添加MycoLight 520
4.将细菌样品与MycoLight 520信号增强剂在黑暗中于37°C孵育5-10分钟或在室温下孵育60分钟
5.通过带有FITC滤光片组的荧光显微镜分析样品

溶液配制

1.储备溶液配制

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1MycoLight 520储备液（100X）：
将100 uL DMSO（组分D）添加到MycoLight 520（组分A）小瓶中，制成100X储备液。

样品示例及操作

1.准备细菌样品，浓度范围为106到108个细胞/ ml。在适当的培养基中使细菌生长到对数后期。通过以10,000 x g离心10分钟除去培养基，然后将沉淀重新悬浮在测定缓冲液（组分C）中。注意：在波长= 600 nm（OD600）处测量细菌培养物的光密度，以确定细胞数。对于大肠杆菌培养，OD600 = 1.0等于8 x 108细胞/ ml。

2.根据需要用测试化合物处理细胞。通过以10,000 x g离心10分钟来去除处理液，然后将沉淀物重新悬浮在适量的测定缓冲液（组分C）中，以使处理过的样品中细菌的浓度与活菌浓度相同。注意：开始治疗之前，请确定细菌培养物的浓度。注意：死细菌可以作为阴性对照，建议使用70％乙醇杀死细菌30分钟，然后煮沸60分钟。

3.将1 µL 100X MycoLight 520储备液和10 µL 10X Signal Enhancer（组分B）加到90 µL的测定缓冲液细菌样品中。

4.充分混合并在黑暗中于37°C孵育5-10分钟，或在室温孵育60分钟，以获得佳染色效果。

5.使用荧光显微镜通过FITC（Ex / Em = 488/530 nm）通道监控细菌的荧光。注意：相同的方案也可用于酶标仪检测。