样本标记分析

注意：该标记方案是针对山羊抗小鼠IgG与ICG的缀合物开发的。

1.准备蛋白质储备溶液（溶液A）：

将100L反应缓冲液（例如，1M碳酸钠溶液或1M磷酸盐缓冲液，pH~9.0）与900L目标蛋白质溶液（例如抗体，蛋白质浓度> 2mg / ml，）混合，得到1 mL蛋白标记储备液。

注意1：蛋白质溶液（溶液A）的pH值应为8.5±0.5。 如果蛋白质溶液的pH低于8.0，则需使用1M碳s氢钠溶液或1M pH 9.0磷酸盐缓冲液将pH调节至8.0-9.0的范围。

注意2：蛋白质应溶解于pH7.2-7.4的1X磷酸盐缓冲盐水（PBS）中。如果蛋白质溶解在Tris或甘an酸缓冲液中，则必须用pH7.2-7.4的1X PBS透析，以除去用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐（例如硫酸铵和乙酸铵）。

注意3：牛血清白蛋白（BSA）、明胶稳定不纯的抗体等标记的效果不理想。 叠d化钠或硫柳汞的存在也可能干扰缀合反应。 可以通过透析或旋转柱除去叠d化钠或硫柳汞，以获得标记结果。

注意4：如果蛋白质浓度低于2 mg / mL，则结合效率明显降低。 为获得标记效率，建议蛋白质浓度范围为2-10 mg / mL。

2.准备染料储备溶液（溶液B）：

将无水DMSO加入到ICG染料小瓶中以制备10-20mM储备溶液。 通过移液或涡旋混合均匀。

注意：在开始缀合之前准备染料储备溶液（溶液B），现配现用，保持溶液新鲜。 染料储备溶液的长期储存可降低染料活性。 溶液B可以在不受光照和潮湿的情况下储存在冰箱中两周。 避免冻融循环。