样本神经元细胞标记方案

该样品标记方案用于用iFluor 488标记神经元细胞。 您可能需要针对特定细胞进行进一步优化。

1.准备染料储备液：

1.1将1mg iFluor 488溶解在100μl200mMKCl中以制备10mM溶液（10mg / ml）。

1.2通过过滤对上述溶液进行灭菌。

2.标记细胞：

2.1通过使超极化电流通过电极，用iFluor 488储备溶液（来自步骤1）标记神经元细胞（例如，Manduca sexta幼虫中的附属植物qian开器运动神经元）。

3.固定细胞：

3.1用4％多聚甲醛在100mM磷酸盐缓冲液（pH 7）中固定细胞30分钟。

样本糖蛋白标记方案

该标记方案被开发用于山羊抗小鼠IgG与iFluor 647酰肼的缀合。您可能需要进一步优化您的特定蛋白质。

1.准备蛋白质醛溶液（溶液A）：

1.1将5mg山羊抗小鼠IgG抗体溶于0.5mL 0.1M乙酸钠，0.15M NaCl，pH5.5中

注意：确保蛋白质浓度> 10 mg / ml，以获得标记效率。

1.2通过离心30-60分钟，用0.2ml的100mM高碘酸钠（21mg / ml）处理蛋白质溶液。

1.3加入30μL乙二醇终止反应。

2.准备染料储备溶液（溶液B）：

2.1将1mg iFluor 染料酰肼溶解在0.1ml DMSO中以制备10mg / ml染料储备溶液。通过移液或涡旋混合均匀。

3.运行缀合反应：

3.1在有效摇动下将10μL染料储备溶液（溶液B）加入50μL蛋白质溶液（溶液A）中。

3.2继续在室温下旋转或摇动反应混合物，在黑暗中保持30-60分钟。

4.纯化缀合物（以下方案是使用Sephadex G-25柱纯化染料 - 蛋白质缀合物的实例。）

4.1根据制造说明准备Sephadex G-25色谱柱。

4.2将反应混合物（直接从步骤3）加载到Sephadex G-25柱的顶部。

4.3一旦样品在顶部树脂表面下方运行，就加入PBS（pH 7.2-7.4）。

4.4向所需样品中加入更多PBS（pH 7.2-7.4）以完成柱纯化。

注1：为立即使用，染料 - 蛋白质偶联物可以等分多次使用，而对于长期储存，需要浓缩或冷冻干燥蛋白质结合物溶液。

注2：对于小规模标记，建议使用即用型旋转商用色谱柱以方便使用。