样品实验方案

简要概述

1.准备细胞进行转染

2.准备Transfectamine 5000-DNA混合物

3.将Transfectamine 5000-DNA混合物添加到细胞培养物中

4.过夜培养

5.用适当的方法分析转染效率

溶液制备

1.工作溶液配制

1.1将2.5ug DNA与200uL无血清培养基混合。

1.2在步骤1中添加7.5 uL Transfectamine 5000。

1.3充分混合并在室温下孵育20分钟。 注意：Transfectamine 5000和DNA的比例需要针对不同的细胞系进行优化，通常：转染试剂（uL）与DNA（ug）的比例= 3-5 uL至1ug

6孔板与10cm板样品方案

样品示例及操作

1.细胞培养准备

1.1转染时将细胞培养至约90％融合。

1.2转染前用新鲜的生长培养基替换。 例如，对于6孔板，每孔用2 mL培养基替换，对于10 cm板，用6 mL培养基替换。

2.转染方案

将Transfectamine 5000 -DNA混合物添加至培养板并培养过夜。 注意：重组蛋白早可在转染后16小时开始检测。转染后72〜96小时可观察到大表达水平。