样品实验方案

简要概述

1.准备转染细胞
2.制备转染试剂-RNA 混合物
3.将转染试剂-RNA 混合物添加到细胞培养物中
4.过夜培养细胞
5.用合适的方法分析转染效率

细胞准备

1.在转染时将细胞培养至 ~ 90% 汇合。
2.转染前更换新鲜培养基。例如，6 孔板每孔更换 2 mL 培养基，10 cm 板更换 6 mL 培养基。

工作溶液配制

1.T转染试剂-RNA 混合物
2.将 2.5 µg mRNA 与 200 µL 无血清培养基混合。
3.在步骤 1 中加入 7.5 µL 转染试剂。
4.混匀并在室温下孵育 20 分钟。
注意：转染试剂与 mRNA 的比例需要针对不同的细胞系进行优化。 通常，转染试剂 (µL) 与 mRNA (µg) 的比率 =（3 至 5 µL）至 1 µg。

6孔板样品方案

操作步骤

1.转染方案

1.1将转染试剂 - mRNA 混合物加入培养板并培养过夜。
注意：重组蛋白表达可以在转染后的8小时内检测到。 转染后约24小时可观察到表达水平。