5-FAM 5-羧基荧光素叠氮化物是美国AAT Bioquest生产的荧光素，5-FAM叠氮化物是通过与炔基反应开发荧光生物共轭物的良好试剂。 5-FAM是羧基荧光素的纯化单一异构体。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的5-羧基荧光素叠氮化物。

操作方案

标记寡核苷酸

1.准备以下试剂：

200mMTHPTA [tris（3-羟丙基三唑基甲基）胺]水溶液

100mM CuSO4水溶液

炔烃修饰的低聚水溶液（尽可能浓缩，例如>10 mg / mL）

100mM抗坏血酸钠水溶液

10mM染料叠氮化物水溶液或DMSO溶液（有关推荐的溶剂，请参阅我们的网站）

2.在反应前将CuSO4与THPTA以1：2的比例混合并充分涡旋几分钟。该溶液在冷冻时可稳定数周。

3.向炔烃改性的低聚物溶液中加入过量的染料叠氮化物（摩尔比为2-5当量）。

4.加入5当量的THPTA / CuSO4工作溶液（来自步骤1）。

5.加入10-30当量的抗坏血酸钠。

6.在室温下搅拌，涡旋或摇动反应混合物30-60分钟。

7.通过所需的方法（例如HPLC）沉淀或纯化乙醇。

标记肽

1.准备以下试剂：

200mM THPTA配体水溶液

100mM CuSO4水溶液

炔烃修饰肽水溶液或DMF溶液（取决于您的肽溶解度，>10 mg / mL）

100 mM抗坏血酸钠水溶液

10 mM染料叠氮化物水溶液或DMSO溶液（有关推荐的溶剂，请参阅我们的网站）

2.在反应前几分钟以1：2的比例孵育CuSO4与THPTA配体。 该溶液在冷冻时可稳定数周。

3.向炔烃修饰的肽溶液中加入过量的染料叠氮化物（摩尔比为5-10当量）。

4.加入5-10当量的THPTA / CuSO4。

5.加入10-20当量的抗坏血酸钠。

6.在室温下搅拌，涡旋或摇动反应混合物30-60分钟。

7.通过HPLC纯化您想要的肽。

标记炔烃有机小分子

1.准备以下试剂：

200 mM THPTA配体水溶液

100mM CuSO4水溶液

炔烃化合物水溶液或DMF溶液（取决于您的化合物溶解度，> 10mg / mL，）

100mM抗坏血酸钠水溶液

10mM染料叠氮化物水溶液或DMSO溶液（有关推荐的溶剂，请参阅我们的网站）。

2.在反应前几分钟以1：2的比例孵育CuSO4与THPTA配体。当冷冻时，该溶液可稳定数周。

3.向炔烃溶液中加入过量的染料叠氮化物（摩尔比为5-10当量）。

4.加入25当量的THPTA / CuSO4。

5.加入50当量的抗坏血酸钠。

6.在室温下搅拌反应混合物30-60分钟。

7.通过色谱或其他方法纯化您想要的分子。

标记生物聚合物

1.准备以下试剂：

200 mM THPTA配体水溶液

100mM CuSO4水溶液

炔烃改性的水中生物聚合物（尽可能浓缩，例如> 5毫克/毫升）

100 mM抗坏血酸钠水溶液

10 mM染料叠氮化物水溶液或DMSO溶液（有关推荐的溶剂，请参阅我们的网站）。

2.在反应前几分钟以1：2的比例孵育CuSO4与THPTA配体。 该溶液在冷冻时可稳定数周。

3.向炔烃改性的生物聚合物溶液中加入过量的染料叠氮化物（负载比：5-20染料叠氮化物/炔烃）。

4.加入5摩尔当量（参考染料叠氮化物）的THPTA / CuSO4。

5.加入10当量的抗坏血酸钠（参见染料叠氮化物）。

6.在室温下搅拌，涡旋或摇动反应混合物30-60分钟。

7.通过凝胶过滤或透析纯化您想要的分子。

标记细胞，细胞裂解物或生物样品

1.准备以下试剂：

100mM THPTA配体水溶液

20mM CuSO4水溶液

300mM抗坏血酸钠水溶液

2.5mM炔烃或叠氮化物标记试剂水溶液或DMSO溶液

2.对于每个叠氮化物或炔烃修饰的细胞或细胞裂解物样品，将以下试剂加入1.5 mL微量离心管中，然后短暂涡旋混合。

50μL细胞或细胞裂解液样品

50μLPBS缓冲液

50μL5mM相应的染料叠氮化物水溶液或DMSO溶液（或染料炔烃）检测试剂

3.加入10μL100mM THPTA溶液，短暂涡旋混合。

4.加入10μL20mM CuSO4溶液，短暂涡旋振荡。

5.加入10μL300mM抗坏血酸钠溶液以引发点击反应，短暂涡旋混合。

6.保护点击反应不受光照，使其在室温下孵育30分钟。

7.点击标记细胞或细胞裂解物并准备用于下游处理和分析。