超高通量基因组测序系统Genome Sequencer FLX System的详细介绍
超高通量基因组测序系统
强大的罗氏第二代超高通量基因组测序系统GS FLX，配备全新的GS FLX Titanium系列试剂，加速生命科学各个领域的快速发展。
GS FLX系统具备专业的分析工具，涵盖用于图谱绘制、序列拼接和扩增子变异检测等各类简单、易操作的图形用户界面(GUI)。测序读长更长，
■ 平均可达400-500bp(图1)；
■ 通量更高，每单次运行可获一百万条高质量数据；
■ 速度更快，完成一次测序仅需10小时；
■ 准确率更高，单条读长超过400bp时，测序准确率仍高于99.6% ；
■ 多倍覆盖下，准确率高于99.99%。
灵活的GS FLX系统， 突破更多的应用领域
■ 全新基因组测序和序列拼接
■ 重测序和图谱绘制
■ 转录组分析
■ 表观遗传学变异检测
■ 宏基因组学和微生物多样性
■ 古生物DNA
■ 病毒基因组测序
■ HIV 测序
■ 扩增子重测序
上样及样品DN断化
GS FLX系统支持各种不同来源的样品序列测定：包括基因组DNA、PCR产物、BACs和cDNA等等。基因组DNA和BACs等样品需被打断至600-900bp的小片断。对于像非编码RNA或PCR扩增子等小分子样品，则不需要这一步。而通过GS融合引物扩增得到的短片段PCR产物可以直接将其固定于DNA捕获磁珠上，如下文“一个片段=一颗磁珠”中所示。
文库的制备
利用分子生物学技术，将3'和5'端的特异性接头(A和B)连接至每
断即构成了工作流程中的DNA文库。(其中GS FLX Titanium 系列试剂盒提供的接头A和B片段不同于GS FLX 标准系列试剂盒提供的)。
一个片段 = 一颗磁珠
单链DNA文库被固定于特殊设计的DNA捕获磁珠上。特异接头使各条DNA 片段分别结合于各自的磁珠之上。结合有不同DNA的磁珠文库经油水混合的扩增试剂
乳化分散后，形成成百上千颗微乳滴， 每一微乳滴内仅含有一颗磁珠和一条特异的样品DN段。
emPCR 扩增(乳滴PCR)
每一DN段在其各自的微乳滴中进行独立扩增，排除了其它竞争性或污染性序列对PCR反应的影响。所有DN段平行扩增，各个磁珠上的不同DN段均获得数
百万个扩增拷贝。随后，打破微乳滴，得到结合于各磁珠的特异扩增片断。
一颗磁珠 = 一条读长
将所有结合有DN段的磁珠置于PicoTiterPlate(PTP板)中进行测序。PTP板的孔径恰好仅能容纳一颗磁珠。将PTP板置于GS FLX测序仪中，单个核苷酸依次流经孔洞
和DNA捕获磁珠间。当所加入的一种或多种核苷酸与模板互补时，便产生化学发光信号，进而被 GS FLX系统的CCD相机记录。
数据分析
通过信号强度和PTP板上的位置信息，内置软件能够在10小时测序运行的同时对1,000,000条数据进行分析。对于测序数据的分析，三种不同的生物信息学分析工具分
别支持以下应用：(1)对高达400Mb大小的全新基因组拼接；(2)对高达3Gb大小的基因组图谱分析；(3)专用于扩增子重测序的图形用户界面。
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