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在BioRobot Universal System上用自动化流程进行扩增反应体系设置。96孔板中柱以交替次序包含不含RNAse的纯水(1、3、5、7、9和11)或4 ng模板DNA(2、4、6、8、10、12)。用QuantiTect Probe PCR Kit,和专为β-肌动蛋白基因设计的引物和探针进行real-time PCR,获得CT值表示。X:在35个循环后,检测不到信号。 无可检测到的交叉感染 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A X 26.1 X 26.0 X 26.2 X 25.9 X 25.8 X 25.6 B X 26.2 X 26.4 X 26.1 X 26.2 X 25.9 X 26.0 C X 26.2 X 26.1 X 26.3 X 25.9 X 26.1 X 26.2 D X 26.5 X 26.4 X 26.1 X 26.0 X 26.2 X 26.4 E X 26.3 X 26.3 X 25.8 X 26.3 X 26.0 X 26.2 F X 26.1 X 26.1 X 26.3 X 26.3 X 25.8 X 25.9 G X 26.5 X 25.9 X 26.5 X 25.8 X 26.0 X 26.3 H X 26.2 X 26.0 X 26.3 X 25.8 X 26.0 X 25.7
测序
BioRobot Universal System配合Application Pack, Sequencing使用,能够自动纯化质粒DNA、回收DNA和进行测序反应体系构建。使用QIAprep 96 Turbo BioRobot Kit,每次可从至多4 x 96个E. coli培养物(1–5 ml)中纯化得到分子生物学检测级别的质粒DNA 。DNA产量具有高度重复性。
使用MinElute 96 UF PCR Purification Kit的全自动化方案每次可以从至多4 x 96个样本中纯化得到PCR产物(>100 bp)。PCR产物的回收率可与手动操作流程相当,证明了全自动方案的可靠性。
Investigator应用
BioRobot Universal System配合Application Pack, Investigator使用,能够纯化法医学样本中的总DNA,包括干血、表面拭子(例如,血液、、唾液和上皮细胞等)、面料上的污渍(例如,血液或者唾液污染的面料等)、烟头、烟草、口香糖和信封。
使用经验证的QIAamp 96技术可进行高效纯化,并且纯化得到的DNA在敏感下游应用中表现良好,如STR分析具有高。强大的纯化程序使用QIAamp 96 DNA Swab BioRobot Kit,确保过程中的安全性,并有助于防止交叉污染。
Principle
BioRobot Universal System提供从不同类型样本中纯化高品质核酸的全自动纯化方案。此外,该仪器以96孔板形式进行下游反应设置。通过自动化纯化核酸和反应体系构建,BioRobot Universal System节省了手动操作时间,并且确保了高效、精简的工作流程。
每个Application Pack都提供纯化和下游反应体系构建。有4种Application Packs可用:
Application Pack, Gene Expression
Application Pack, Genotyping
Application Pack, Sequencing
Application Pack, Investigator
流程
BioRobot Universal System的自动化纯化为简单的结合、洗涤、洗脱过程。用户选择纯化实验方案,然后根据软件指导的信息完成所需的余下步骤来设置仪器。每次纯化的样本数量取决于样本类型和纯化的分析物(参见下表)。
样本通量/样本类型 | 应用 | 每次纯化的样本 | 下游反应体系构建 |
血液(收集在PAXgene Blood | RNA纯化 | 48或者96个样本 | real-time RT-PCR;cRNA制备 |
细胞 | RNA纯化 | 96的倍数,至多192个样本 | real-time RT-PCR;cRNA制备 |
组织 | RNA纯化 | 8的倍数,24–96个样本 | real-time RT-PCR;cRNA制备 |
口腔拭子 | 基因组DNA纯化 | 8的倍数,至多192个样本 | real-time PCR:Quantifiler分析、 |
血液 | 基因组DNA纯化 | 8的倍数,32–96个样本 | real-time PCR |
法医学样本 | 基因组DNA纯化 | 8的倍数,24–96个样本 | Quantifiler分析、 |
E. coli培养物 | 质粒DNA纯化 | 32–384个样本(32倍数中32–96个样本;96倍数中96–384个样本) | 测序反应体系构建 |
扩增反应 | DNA产物回收 | 8–384个样本(8倍数中8–96 个样本;96倍数中 96–384个样本) | – |
有专为病毒核酸纯化设计的实验方案,如痰、血浆、呼吸道样本和培养基中的细菌DNA;请联系QIAGEN Technical Services或当地的销售代表以获得更多信息。
应用
BioRobot Universal System适用于以96孔板形式进行中到高通量的实验室应用,如:
• 基因表达分析
• 基因分型研究
• 测序
• 法医应用
软件
QIAsoft 5是BioRobot Universal System的控制系统,提供简单的系统操作和可重复的样本处理。详细的上样检查,确保样本、试剂和实验室器具正确安装,在工作台设置过程中,有助于避免人为失误。QIAsoft 5提供便捷的用户管理,并可使用Checksum校验不恰当的修改以保护报告与结果文档。
QIAsoft 5同样也满足用户对21 CFR Part 11的技术需求。此外,由QIAsoft 5使用或者生成的文件能够用于实验室信息管理系统(LIMS)进行便捷的数据管理与兼容。QIAsoft 5内的电子表格功能为制定的应用提供便捷的移液方案。