产品及特点

脓肿分枝杆菌复合群(Mycobacterium abscessus complex,MABC)是由 脓肿分枝杆菌、 马赛分枝杆菌和 Mycobacterium bolletii 三种菌组成的复合群, 是可引起人体致病的重要非结核分枝杆菌(NTM)。近年来,NTM 的发病明显增多, MABC 起主要贡献,有许多 MABC 引起散发感染和院内暴发感染的报道。MABC 主要侵体肺脏 , 引起 MABC 肺病 ,还可以侵犯肺外组织器官如皮肤和软组 织、淋巴结、 骨骼、 关节等 ,甚至引起角膜炎、 心内膜炎等 ,重症患者可引起全 身播散性疾病、MABC 菌血症 。MABC 病诊断困难 , 棘手 。 因此快速检测 脓肿分枝杆菌具有重要的意义。本产品就是以探针法 qPCR 技术为基础开发的专 门检测脓肿分枝杆菌的试剂盒 ,它具有下列特点:

1.    即开即用 ,用户只需要提供样品 DNA 模板。

2.    引物和探针经过优化 ,分析灵敏性高 ,可以达到 100 拷贝/反应。

3.   提供阳性对照 ,便于区分假阴性样品。

4.   特异性高 ,  引物是根据脓肿分枝杆菌 DNA 高度保守区设计 ,不会跟其他生

物的 DNA 发生交叉反应。

5.    既可用于定性检测 ,又可用于定量检测 。用于定量检测时线性范围至少为 5

个数量级。

6.   本产品足够 50 次 20μL 体系的探针法荧光定量 PCR 反应。

7.   本产品只能用于科研。

规格及成分

本产品采用五孔盒包装

成分

编号

规格

包装材料

2 ×Probe qPCR MasterMix

981201

0.5 mL

0.5mL 本色盖

荧光 PCR 专用模板稀释液

180701

1 mL

1.5mL 绿盖管

超纯水

210806

1 mL

1.5mL 蓝盖管

qPCR 引物-探针混合液

yp15-67711yc

150 μL

0.5mL 棕色管

脓肿分枝杆菌 qPCR 阳性对照

( 1 × 10E7 拷贝/μL)

pc67711-MW1

47113 1

50 μL

0.5mL 黄盖管

使用手册

15-67711sc

1 份

无

运输及保存

低温运输 ,-20℃保存 ,保存期限为 12 个月。

自备试剂

样品 DNA。

使用方法

一、稀释标准曲线样品 (以 10E1- 10E6 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例)  。 由于标准品浓度非常高 ,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行 ,千万不能 污染样品或本试剂盒的其他成分)  。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原 , 本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供无传染性的 DNA 片段作为阳性对照。

1. 标记 6 个离心管 ,分别为 6 ,5 ,4 ,3 ,2 ,  1。

2.    用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液 , 用带芯枪头, 下同)  。

3.   在 6 号管中加入 5 μL 1 × 10E7 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供),充分震 荡 1 分钟 ,得 1 × 10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品 。放冰上待用。

4.   换枪头 ,在 5 号管中加入 5 μL 1 × 10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所 得),充分震荡 1 分钟,得 1 × 10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

5.   换枪头 ,在 4 号管中加入 5 μL 1 × 10E5 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所 得),充分震荡 1 分钟,得 1 × 10E4 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品 。放冰上待用。

二、样品 DNA 的制备

7. 如果有 N 个样品, 设置 N+2 个提取,多出的一个是 PC (样品制备阳性 对照)  ,一个是 NC (样品制备阴性对照)  。可以用 10μL 上步所得 4 号稀

释液再加上一定量的水使总体积跟核酸制备试剂盒所要求的起始样本体积 一样 , 以此作为 PC 。另外用水作为 NC。

8.    用自选方法纯化样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数样品 DNA 提取试剂

盒兼容 。也可以选购本公司的免提取核酸释放剂。

三、Probe qPCR 反应 ( 20μL 体系 ,在样品制备室进行)

9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复 ,则标记 N+9 个 PCR 管 ,其中 N+2 个 用于上步得到的 N+2 个样品 ,   1 个用于 PCR 阴性对照 (用水做模板)  ,6 个用于标准曲线 。如果做定性分析并且只做 1 次重复 ,则标记 N+4 个 PCR 管,其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品 ,1 个用于 PCR 阴性对照 (用 水做模板)  ,  1 个用于 PCR 阳性对照 (直接用第 6 步第 4 号管的阳性对照 稀释液做模板)  。下面只以定量分析为例描述操作步骤。

10. 在标记管中按下表加入各成分 (本表只列出一次重复 。样品管和阴性对照设 置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好 后 加)  :