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厦门市所在地
细胞培养操作 | ||||
收货方式 | T25瓶 | 冻存管 | ||
初步平衡 | 用75%酒精擦拭细胞瓶表面,放37度培养箱内静置培养2-4h,以便稳定细胞状态 | 无须平衡,直接放入-80冰箱(不超过一周)或者液氮罐保存,建议尽早复苏 | ||
传代密度 | 细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养 | 第二天换液并检查细胞密度 | ||
传代比例 | 传代建议1:2传代,1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿 | 一管细胞建议接种到10cm培养皿或者T25瓶 | ||
传代方法 | a、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,使消化液浸润所有细胞,将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-2 min(视细胞情况而定),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加2-3ml*培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中,1000 rpm离心5 min,弃去上清液,补加1-2 mL培养液后吹匀。 c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中,置于培养箱中培养。 | 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min,弃去上清液,加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10 cm皿中,加入约8 mL培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。 | ||
注意事项 | 1.运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。 2.因运输问题,部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片,是正常现象。 | 1.收货时若发现干冰化完,检查冻存管是否融化,若已融化需直接离心细胞接种观察,若未融化可以将细胞按正常步骤保存; 2.为保证细胞的高存活率,收到产品后,请立即解冻复苏细胞。 | ||
到货须知 | 1.收到细胞后,首先观察并拍照记录细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,干冰运输的细胞检查干冰是否*挥发,细胞是否解冻,若有上述现象发生请及时和我们联系。 2.静置完成后,取出细胞培养瓶,镜检、拍照(当天以及第 2,3 天请拍照),记录细胞状态 (所拍照片将作为后续服务依据);建议细胞传代培养后,定期拍照、记录细胞生长状态。 3.由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,告知细胞的具体情况,以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。 4.仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等,确保细胞培养条件一致,若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题,责任由客户自行承担。 | |||
备注:客户在细胞培养过程中,有任何技术问题我们随时给予解答。 | ||||
三、细胞冻存操作 | ||||
冻存液配方 | 无血清冻存液,液氮储存 | |||
细胞密度 | 待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例 | |||
冻存方法 | a、收集细胞及细胞培养液,装入无菌离心管中,1000 rpm条件下离心4 min,弃去上清液,用PBS清洗一遍,弃尽PBS,加 1 mL血清重悬细胞,进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液,使细胞密度5x106~1x107/mL,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱,24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 | |||
注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性,若有异常,及时调整实验方案 |