冰冻切片氧化应激活性氧(ROS)初级荧光测定试剂盒产品说明书
时间:2014-11-24 阅读:1716
YIJI 冰冻切片氧化应激活性氧(ROS)初级荧光测定试剂盒产品说明书(中文版)
主要用途
YIJI 冰冻切片氧化应激活性氧(ROS)初级荧光测定试剂是一种旨在通过透膜荧光染色剂二氯荧光乙
酰乙酸盐,在组织氧化损伤条件下,产生荧光,来定量检测冰冻组织内活性氧族的存在状况的而经典
的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。适宜于冰冻动物组织的分析。可以被用
于细胞凋亡、信号传递、衰老、代谢和营养学等的研究。产品严格无菌,即到即用,操作简易,定性检测,
性能稳定。
技术背景
超氧自由基阴离子(superoxide radical;O2-)、过氧化氢(hydrogen peroxide;H2O2)、羟自由基或氢氧基
(hydroxyl radical;OH-)、过氧化基(peroxyl radical;ROO-)、氢过氧自由基(hydroperoxyl;HOO)、烷
氧自由基(alcoxyl radical)、氮氧基(nitric Oxide;NO-)、过氧亚硝基阴离子(peroxynitrite anion;ONOO-)
次氯酸(hypochlorous acid;HClO)、半醌自由基(semiquinone radical)、单线态氧气(singlet oxygen)等
细胞内活性氧族(Reactive Oxygen Species;ROS)的产生和增多,将导致细胞衰老或凋亡。2',7'-二氯荧光
乙酰乙酸盐(2',7'-dichlorofluorescein diacetate,DCFH-DA)一种*自由通过细胞膜的染色剂。一旦被过
氧化氢、过氧化基、过氧亚硝基阴离子等氧化,便产生荧光。据此测定组织细胞内活性氧族的浓度。
产品内容
YIJI 清理液(Reagent A) 毫升
YIJI 染色液(Reagent B) 微升
YIJI 稀释液(Reagent C) 毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存 YIJI 染色液(Reagent B)在-20℃冰箱里,严格避免光照;其余的保存在 4℃冰箱里,有效保
证 12 月
用户自备
1.5 毫升离心管:用于工作液配制的容器
培养箱:用于染色孵育
荧光显微镜:用于观察荧光组织
实验步骤
实验开始前,将-20℃冰箱里的试剂盒中的 YIJI 染色液(Reagent B)置入冰槽里融化,YIJI 稀释液
(Reagent C)置于室温预热。然后移出
微升 YIJI 染色液(Reagent B)到新的 1.5 毫升离心管,
加入微升 YIJI 稀释液(Reagent C),混匀后,标记为 YIJI 染色工作液,置入暗室里。然后进行下列操作。
1. 准备 5 片待测的厚为 10 微米的未经固着处理的冰冻切片
2. 置于室温下,小心加上
4. 小心加上 微升预冷的 YIJI 清理液(Reagent A),铺满整个切片表面
3. 小心移去切片上的 YIJI 清理液(Reagent A)微升室温预热的 YIJI 染色工作液,铺满整个切片表面
5. 在 37℃湿润培养箱里,孵育 20 分钟(注意:避免液体蒸发)
6. 小心移去切片上的 YIJI 染色工作液,避免光照
7. 小心加上 微升 YIJI 清理液(Reagent A),铺满整个切片表面
8. 小心移去切片上的 YIJI 清理液(Reagent A)
9. 放上盖玻片或封片
10.即刻在荧光显微镜下观察(定性检测):激发波长 490nm,散发波长 530nm――荧光增强,表明活性氧
族(ROS)含量高
注意事项
1. 本产品为 50 次操作
2. 所有操作均须无菌状态下进行
3. 建议使用新鲜组织(手术切除后 1 小时内)制成的冰冻切片
4. 操作时,须戴手套
5. YIJI 染色工作液避免光照
6. 孵育时,须避免光照
7. 建议组织染色完成后,即刻进行荧光定性分析
8. 本公司提供阳性对照甲萘醌溶液,观察组织荧光增强现象
9. 本公司提供系列活性氧检测试剂产品
质量标准
1. 本产品经鉴定性能稳定
2. 本产品经鉴定荧光清晰
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上海一基实业有限公司
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